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研究背景和目的:糖尿病足(DiabetesMeellitusFoot,DF)是糖尿病常见的慢性并发症之一,其发病率在不断增长,已成为糖尿病患者致死和致残的主要原因之一。但迄今为止,现代医学对DF尚缺乏肯定的治疗方法。要提高糖尿病患者的生存质量和延长生命,就必须寻找治疗DF的有效方法。
DF的发病和糖尿病并发血管病变、神经病变、感染及多种诱因有关。大量研究表明,对DF的防治就必须重视糖尿病下肢血管动脉粥样硬化对该病的影响,并有必要对影响动脉粥样硬化病理关键之一的血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecell,VSMC)的增殖以及中医药对此的防治作用机制进行深入的研究。
我们既往的研究提示,益气养阴,活血化瘀为主的方药组成对糖尿病足的病情转归有利,本研究课题从临床实际出发,在原有临床研究的基础上进行深一步的研究,对亟待解决的跨学科疑难病症进行基础研究。用血清药理学与现代分子生物学相结合的方法,探讨中药复方制剂对糖尿病大鼠模型血管平滑肌细胞增殖的抑制作用,进而为研究阻止糖尿病下肢动脉粥样硬化的进一步发展奠定理论基础。
方法:1.动物血清配制:选择纯种新西兰家兔,灌服不同剂量的糖足方中药制剂,制备含有不同药物浓度的兔血清。2.细胞培养:用组织块种植法体外培养糖尿病大鼠模型的髂动脉平滑肌细胞并用不同浓度含药血清进行干预。3.同位素液闪测定氚标记胸腺嘧啶脱氧核糖核苷(3H-TDR)掺入量,检测含药血清对平滑肌细胞增殖的影响。4.流式细胞仪测定细胞周期时相。5.对不同浓度含药血清诱导培养后的平滑肌细胞进行细胞计数比较。
结果:本实验中糖足方含药血清诸组呈浓度依赖性地表现为3H-TDR掺入量显著减少,3个含药血清组3H-TDR掺入量均明显低于正常血清对照组(P<0.01);各组细胞计数与正常血清对照组比较明显减少(P<0.01);流式细胞仪测定各含药血清组处于S和G2/M期细胞百分比显著低于正常血清组(P<0.01)。
结论:1.糖足方含药血清抑制体外培养糖尿病大鼠VSMC增殖,且抑制效应呈浓度依赖性。2.糖足方含药血清抑制体外培养糖尿病大鼠VSMC增殖机制是其有效成分阻止细胞进入生长分裂周期,而非其毒性作用。3.糖足方口服后其母体药物成分原型或其代谢产物,及诱导机体产生的内源性成分含有抑制体外培养糖尿病大鼠VSMC增殖成分。4.糖足方抑制VSMC增殖可能是其抗动脉粥样硬化的作用机理之一。