五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果实,具有补肾宁心等功效。生品长于敛肺止咳,醋制后增强保肝护肝的作用。本课题比较研究了五味子醋制前后化学成分的变化、药效的变化以及对大鼠胆汁、尿液、粪便中代谢产物的影响,同时运用代谢组学的新技术和方法深入探讨五味子保肝作用机理,揭示五味子醋制入肝理论,为五味子的临床安全、有效、合理用药提供科学理论依据。按照2010年版《中国药典》一部有关规定,对五味子样品来源及品质进行鉴定,结果均符合规定,同时按课题前期研究基础炮制醋五味子。五味子醋制前后化学成分的比较:对五味子中主要有效成分---木脂素进行了比较研究。采用高效液相色谱法同时测定生、醋五味子醇提液中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和五味子丙素的含量。结果显示:醋制后五味子中木脂素总含量增高,且醋制前后五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素之间的比例发生了改变。由此可见,醋制后木脂素单体成分的配比及含量发生了相应的变化。生、醋五味子对小鼠CCl4所致急性肝损伤的影响:小鼠连续灌胃7天,于第7天给药后1小时造模,16小时后,取血及肝脏。采用全自动生化仪及病理切片等方法系统评价生、醋五味子对小鼠急性肝损伤的保护作用。结果表明,生、醋五味子对小鼠急性肝损伤均有保护作用,且醋品的效果更明显。本课题系统建立了生物样品,包括大鼠胆汁、尿液及粪便中的生、醋五味子的HPLC-MS分析方法,并运用此方法研究了大鼠灌胃给予生、醋五味子后大鼠体内原型代谢物的变化,推测其代谢途径。结果表明:生、醋五味子经原型药物排出体外的量较少,相比较胆汁代谢和尿液、粪便代谢而言,胆汁中原型药物的累积代谢量高于尿液和粪便中,推测五味子中原型代谢物主要通过胆汁代谢,且醋五味子有促进胆汁代谢的作用。利用以UPLC-TOF-MS分析技术和模式识别技术为核心的代谢组学方法,研究生、醋五味子给药后,大鼠血浆中内源性代谢产物的动态变化,由大鼠在注射CCl4后24 h代谢模式的2D-PCA示意图显示:生、醋五味子组有明显靠近空白组的趋势,由3D-PLS-DA示意图显示:醋五味子效果优于生五味子,这与传统“醋制入肝”理论相呼应。结合二维(PCA图)、三维(PLS-DA图)样品分布得分图表征:运用代谢组学的方法进一步证明了生、醋五味子均具有保肝作用,且醋品效果更好。同时,对内源性代谢产物的鉴定,共找出了 10个可能的生物标记物,3个生、醋五味子差异性化合物,通过体内生物标记物的变化来指导临床合理用药。综上所述,五味子经过醋制后主要有效成分五味子醇甲等发生了量变及配比变化;小鼠CCl4所致急性肝损伤实验结果表明:生、醋五味子对小鼠急性肝损伤均有保护作用,且醋品的效果更明显;HPLC-MS联用的方法测定了灌胃给予生、醋五味子后大鼠胆汁、尿液、粪便中的原型代谢物,结果可知其以原型排出体外的量较少,相比较胆汁代谢及尿液、粪便代谢而言,推测五味子原型药物的主要代谢途径可能为胆汁代谢,与传统炮制理论“肝胆相照”相呼应;UPLC-TOF-MS分析技术和模式识别技术为核心的代谢组学方法阐明了生、醋五味子给药后,大鼠血浆中内源性代谢产物的变化。结果可知:醋五味子效果优于生五味子,与传统“醋制入肝”理论相呼应,同时鉴定出了五味子对肝损伤有干预作用的10个差异性生物标记物指导临床合理用药。通过生、醋五味子化学成分研究、药效学研究、外源性代谢物研究以及代谢组学研究,阐明五味子物质基础变化与外源性代谢物的关联性、内源性代谢产物与外源性代谢产物的系统性以及五味子“醋制入肝”效应的相关性,科学地解释五味子醋制后保肝作用机理,更好地指导临床安全、有效、合理用药。本课题是在建立血浆代谢组学方法的基础上,应用传统药理学指标与代谢组学研究所揭示的生物化学变化相结合的方法,为CCl4诱导的大、小鼠急性肝损伤的机制研究及药物药效作用的整体评价提供新的思路和视野,并且发现代谢组学技术在肝病的早期诊断上有很大的潜力,可以为临床诊断提供科学依据,非常值得进一步的深入探讨。