论文部分内容阅读
近年来,科学家从海绵、蓝细菌、海鞘、海兔等海洋生物分离得到了许多海洋环肽,这些环肽大部分都具有独特的化学结构和多样的生理活性,如杀虫、抗菌、抗病毒、抗癌、肿瘤促进剂、抗炎和免疫抑制等作用。本文继续从海洋生物中寻找海洋活性化合物,通过研究,从海藻中发现了一种新的具有抗肿瘤活性的环五肽化合物Galaxamide（d1）,同时对该化合物及其类似物进行了全合成,并进行了抗肿瘤活性筛选及机理研究。第二章,对采集于中国南海西沙群岛永兴岛红藻乳状丝节藻的化学成分进行了分离,从中发现了环肽Galaxamide,通过IR,1H NMR,13C NMR,TOF-MS-ES+,TOF-MSMS ES+,HSQC,TOCSY,HMBC等波谱手段确定了其结构,为环（亮氨酰-N-甲基亮氨酰-亮氨酰-亮氨酰-N-甲基-亮氨酰）,用Marfey试剂法确定了分子的构型为SSSSS。第三章,为解决药源问题,设计合成了化合物Galaxamide,以Boc-亮氨酸和N-甲基亮氨酸苄酯为原料设计了一条合成路线:把Boc-亮氨酸和N-甲基亮氨酸苄酯缩合得到二肽片断,用20%的TFA/二氯甲烷脱除二肽的Boc保护基后与Boc-亮氨酸缩合得到三肽片断,再分别经Pd/C催化常温常压下氢解脱除二肽片断的苄基,用TFA脱除三肽片断的Boc保护基,再进行缩合,得到五肽片断。再分别脱除五肽两端的保护基后,利用混合环合试剂TBTU/HATU/DEPBT关环得到目标产物,三步总收率为42.5%。整个线型肽的合成中我们选择DEPBT作为缩合试剂,发现使用该试剂反应完成后,无需后处理,直接进行柱层析就能得到产物。另外,以同样的方式设计并合成了Galaxamide的五个类似物（d2,d5-d8）,关环收率为36.4%—56.9%。第四章,用Galaxamide及其类似物与部分中间体分别对人乳腺癌细胞株（MCF-7）、人肝癌细胞株（Bel-7402）、人肝癌细胞株（HepG2）和人宫颈癌细胞株（Hela）四种肿瘤细胞用MTT法进行了体外抗肿瘤活性筛选,并对化合物IC50值小于50μg/ml的化合物进行了统计,发现8个化合物对不同的肿瘤细胞有不同程度的抑制作用,进一步分析这些化合物的构效关系,发现随着N-甲基数增多,化合物的活性有增强的趋势;不同构型环肽（d1,d5,d6）之间的活性有明显的差别。另外,对Galaxamide抗肝癌细胞株Bel-7402的初步机制进行了研究,发现该化合物对肝癌细胞株Bel-7402有明显的抑制作用,考察该化合物对Bel-7402细胞周期的影响,发现大部分细胞被阻滞在G2/M期;Annexin V-FITC/PI实验表明d1能诱导Bel-7402细胞调亡;线粒体膜电位实验表明d1能使Bel-7402细胞线粒体膜电位下降。由此,初步判定d1是通过线粒体途径诱导Bel-7402细胞调亡。