前言 体外授精—胚胎移植技术(In vitro inferfilizafion-embryo transfer IVF-ET)发展至今，在促排卵方案，胚胎培养技术及培养液的改进方面有了许多新的突破，但如何提高较低的胚胎种植率及临床妊娠率，始终困扰着生殖医学工作者。 囊胚培养和移植是近期IVF-ET治疗中的一大进展，在国外的许多IVF中心，已将这作为常规技术进行应用。国内近年也已在少数实验室开展了这项研究。 本实验采用序贯培养的方法，对30例IVF-ET的患者进行囊胚培养及移植，并与30例在胚胎卵裂期移植的IVF-ET患者作配对研究，以探讨囊胚培养及移植的种植率、临床妊娠率及多胎妊娠率。 资料与方法 1、病例选择： 于2002年9月至2003年2月，在沈阳市妇婴医院生殖中心就诊的IVF-ET患者中随机选择30例年龄在25岁-35岁，平均年龄(29.9±2.9岁)，取卵数在10枚以上，平均取卵数(13.8±3.8)枚，作为实验组，进行囊胚培养及移植。用配对设计的方法于2002年9月至2003年2月在沈阳市妇婴医院生殖中心就诊的IVF-ET患者中选择30例年龄在25岁-35岁，平均年龄(29.5±3.1)岁，取卵数在10枚以上，平均取卵数(13.8±3.1)枚，作为对照组，进行卵裂期胚胎移植。实验组与对照组按年龄相差2岁左右，MⅡ期卵子相差2个左右，超促排卵方案一致，不孕病因类似进行配对。 2、实验方法： 采用GnRH-α(Gonadotrophin-releasing hormone)／FSH(Fllicle Stimulating Hormone)／HCG(Human Chorionic Gonadotrophin)长周期促排卵方案，B超监测卵泡发育，至卵泡直径大于18mm，主导卵泡2-3个以上，子宫内膜厚度达9~，血清中EZ含量大于1 835p岁而，注射HCGl0(刃OIU，34一36h后经阴道超声介导取卵。精液采取SpermGrad翎密度梯度离心法处理，受精按sx10，个直线活动精子/d的密度进行受精。囊胚组采用微滴培养法，用序贯培养基1020、1 026及1029培养，于Days上午进行囊胚评估，并移植1一枚囊胚，平均移殖囊胚(1 .3士0.6)枚;对照组也采取微滴培养方法，用1020及1026培养基培养，Dar3胚胎发育至6名细胞进行胚胎移植;移植3枚胚胎。两组均采用黄体酮进行黄体支持，移植后14天检测晨尿HCG及血p-HCG，晨尿HCG阳性，血p一HCG〕200MIU/L，移植48天后进行:B超检查，见胎囊，胎心，为临床妊娠，所有患者随访至妊娠10周。实验材料 1、试剂:试剂由美国sAGE Bioph~a公司提供的Quiun”Advantage‘m序贯培养基1023、1020、xo26、1029、HAs、spermGradTM及去离子水。 2、仪器:德国的ZEISS Axioven200解剖镜，ZEISS Stelni200O倒置镜，美国的MODEL 3 131三气培养箱(CO:、0:、N:)，MODEL 31llCO之培养箱，实验中所用培养皿及试管均由美国Bectoh Dickinson公司提供。 3、资料处理:所有数据及定量资料输人电子计算机，利用5155一PC统计软件进行统计学处理，检测结果以又士S表示，对组间年龄、取卵数等计量指标的比较，采用t检验;组间率的比较采用XZ检验。实验结果 l、囊胚组与卵裂组胚胎种植率的比较，经统计学分析，X之二9.44，按a二O，05水准，P<0.05，差异有显著性，即囊胚组的胚胎种植率高于卵裂组。 2、囊胚组与卵裂组的临床妊娠率比较，经统计学分析XZ== 4.38，按a二0 .05水准，P<0.05，差异有显著性，即囊胚组的临床妊娠率高于卵裂组。 3囊胚组与卵裂组多胎妊娠率的比较，经统计学分析，X“二2 .67，按a二0.05水准，P>0.05差异无显著性，即囊胚组与卵裂组多胎妊娠率的比较经统计学分析差异无显著性。讨论 通常IVF周期在取卵后2一天进行胚胎移植，这时一般在4一细胞期，成功率为10%一%，而在体内4名细胞期胚胎尚位于输卵管中，因此在囊胚期进行胚胎移植使胚胎发育与子宫内膜同步，从而提高胚胎种植率，临床妊娠率，减少移植的胚胎数，为降低多胎妊娠创造条件。 以往使用简单培养液，囊胚获得率较低，单一培养液作体外培养，虽可获得一定比例的囊胚，但活力较差。近年国外开始使用一系列培养液进行序贯培养，结果显示囊胚获得率一般在50%左右，妊娠率50%。本实验采用的ro20及1 026培养液不含葡萄糖，有利于早期胚胎的发育，而1029培养液含有较高浓度的葡萄糖，适用8细胞胚胎及囊胚的发育，本实验研究结果囊胚形成率47 .59%，囊胚种植率56.76%，临床妊娠率53.30%。小结 通过本研究，我们充分认识到囊胚培养及移植在IvF一ET中很大程度地提高了WF一ET的成功率，并避免了3胎以上的多胎妊娠。 特别是目前序贯培养技术的提高及培养环境的改变能有效地获得优质囊胚。选择在囊胚期移植，经过了人类胚胎发育阻滞阶段(8细胞期)的筛选，可获得最具有活力的胚胎进行移植;囊胚期移植更符合生理情况，有利于增加子宫内膜与胚胎发育的同步性，因而可获得更高的胚胎种植率及临床妊娠率。另外，序贯培养基延长了胚胎的体外培养时间，囊胚活力不因体外培养时间的延长而降低，由于囊胚的种植率高，也提示在囊胚移植的应用中，可以再提高妊娠率。结论1、囊胚组的胚