龙胆酚性物质基础及其抗炎活性的研究

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龙胆(Gentianae Radix et Rhizoma)作为传统中药,具有保肝利胆的功效。2020版药典仅以龙胆苦苷一种环烯醚萜类为依据,对龙胆药材进行质量评价,这不足以反映龙胆药效和资源情况。本文对龙胆中酚性成分及其生物活性进行了系统性研究,希望进一步分析其临床疗效的物质基础,并为龙胆药材评价提供可借鉴的方法。首先,借助UPLC-Q-TOF-MS/MS分析,在龙胆提取物中筛选出芒果苷、秦皮乙素、阿魏酸和山奈酚四种酚性化合物作为指标成分,建立HPLC定量检测酚性化合物含量的方法。以四种指标成分和提取物总酚含量为依据,利用Box-Behnken响应面法优化酚性成分的提取工艺:盐酸浓度为0.06 mol/L、液固比为132:1、提取时间为6.6 h,四种指标成分的总量最高为37.484μg/g,误差仅为1.27%,总酚含量最大值为10.03 mg/g。同时,对16批不同产地的4种龙胆进行资源评价,采用环状热图分析、主成分分析和Q型层次聚类的分析方法,证明了四种指标成分可以有效地对龙胆进行质量控制。其次,从细胞和整体动物层面研究了龙胆酚性提取物的抗炎活性及其作用机制。在细胞层面,龙胆酚性提取物可以有效抑制LPS诱导RAW264.7巨噬细胞中一氧化氮产生,降低了炎性细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α并提高了IL-10的含量。在整体动物层面,龙胆酚性提取物可以有效抑制卡拉胶诱导的小鼠足趾肿胀,其活性接近阿司匹林并超过等剂量的龙胆苦苷;对足趾组织进一步分析,发现炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10的m RNA转录水平与细胞炎症模型结果的趋势相同;通过Western Blotting分析,发现龙胆酚性提取物有效降低了i NOS、COX-2、p65、p-p65、p-IκB蛋白的表达量。由此推测,龙胆酚性提取物的抗炎活性可能通过抑制i NOS/COX-2/NF-κB信号通路进而发挥作用。最后,借助UPLC-Q-TOF-MS/MS分析,对代表性龙胆的提取物进行化学成分研究。依据Mass Bank、Sci Finder和自建数据库,定性鉴别出59种化合物。对小鼠灌胃给予酚性提取物并研究其入血成分,鉴定出当药醇苷、金合欢素、伞形花内酯、咖啡酸等十四种提取物中的原型成分,预测这些化合物在抗炎活性中发挥关键作用。
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