论文部分内容阅读
鸡蛋的产量和蛋品质与国民经济和人民生活息息相关，以地方品种鸡为基础进行鸡蛋生产潜力巨大，改良地方品种蛋鸡势在必行。欣华鸡是以地方鸡品种培育的配套系，有耐粗饲、抗逆性及适应性强等特点，但对中低遗传力性状（开产日龄、产蛋数及蛋品质等）使用常规方法的育种改良并不理想。本研究以欣华鸡E系为试验素材，采用PCR-RFLP方法对DRD2、IGF-1、HDLBP和ADRA1β基因进行分型，使用分子生物学方法对繁殖生长轴中四个基因的SNPs位点多态性进行检测并与蛋用性状进行关联分析，希望从中筛选潜在分子标记，为加快欣华鸡品种改良和育种奠定基础。本研究试验结果如下: 1、对DRD2、IGF-1、HDLBP和ADRA1β基因的组织表达谱研究发现不同时期欣华母鸡的心、肝、肾、脑、胸肌、输卵管和垂体组织中存在mRNA水平的表达差异。 2、通过一代测序和PCR-RFLP的方法共检测出位于DRD2、IGF-1、HDLBP和ADRA1β基因调控区、内含子和外显子共31个SNP位点。 (1)SNP位点与产蛋性状的关联分析发现:DRD2基因与开产日龄相关的位点是SNP1、SNP4位点;与产蛋数相关的位点是SNP2位点;与开产体重、蛋重、连产长度相关的位点的是SNP3位点。IGF-1基因与开产日龄相关的位点是SNP5、SNP6位点;与产蛋数相关的位点是SNP8、SNP5位点;与开产体重、连产长度相关的位点是SNP7位点。HDLBP基因的SNP9位点与开产体重、连产长度相关。ADRA1β基因的SNP10位点与连产长度、产蛋数相关。 (2)SNP位点与蛋品质性状的关联分析发现:DRD2基因与蛋黄重相关的位点是SNP1、SNP2、SNP4位点;与哈氏单位相关的位点是SNP1、SNP4位点;与蛋壳强度相关的位点是SNP3;与蛋黄颜色相关的位点是SNP1位点;与蛋清重相关的位点是SNP4位点。IGF-1基因的SNP8位点与蛋形指数相关。HDLBP基因的SNP9位点与哈氏单位相关。ADRA1β基因的SNP10位点与蛋壳强度相关。 3、联合单倍型的关联分析发现DRD2基因4个位点的(SNP1、SNP2、SNP3、SNP4)单倍型组合与最长连产和哈氏单位关联，且各位点间不存连锁不平衡。IGF-1基因4个位点的(SNP5、SNP6、SNP7、SNP8)单倍型组合与平均连产极、最长连产和哈氏单位关联，仅SNP7和SNP8位点间存在连锁不平衡。 4、对4个候选基因中关联到的10个SNP进行了生物学功能预测分析，发现IGF-1基因位于第一外显子上游的的SNP8位点发生的突变点位于转录因子附近，但其突变并未发生在转录因子的保守碱基处;ADRA1β基因的SNP10位点发生的非同义突变，使天冬氨酸(D)突变为甘氨酸(G)。 5、基于DRD2、IGF-1、HDLBP和ADRAβ基因的编码序列所构建的进化树，通过进化分析，在Codeml中利用基因表达的氨基酸序列替换模型程序Model1和Model2、Model7和Model8进行种间正选择检验，发现DRD2、IGF-1、HDLBP和ADRA1β基因在进化过程中均受到了强烈的纯化选择作用和功能约束，这意味着该基因在复制后受到了正选择作用。 本研究通过SNP关联分析、联合单倍型关联分析、预测及进化分析，发现DRD2基因和IGF-1基因与欣华鸡蛋用性状关联且基因保守程度高，推测其可以作为影响蛋用性状的候选基因;HDLBP基因和ADRA1β基因仅单个位点与蛋用性状关联，其作为蛋用性状的候选基因需要更大群体、更多世代问的进一步验证。