【摘 要】
：
目的阐明卵巢衰老分子机理、建立早期干预策略具有重要现实意义。颗粒细胞是卵巢内重要的体细胞,其增殖和凋亡的失衡是触发卵泡闭锁,并最终导致卵巢早衰或女性不孕的重要原因。本课题拟观察转化生长因子β1（transforming growth factorβ1,TGFβ1）与早发性卵巢功能不全（premature ovarian insufficiency,POI）疾病的相关性,并探索TGFβ1通路对颗粒细
论文部分内容阅读
目的阐明卵巢衰老分子机理、建立早期干预策略具有重要现实意义。颗粒细胞是卵巢内重要的体细胞,其增殖和凋亡的失衡是触发卵泡闭锁,并最终导致卵巢早衰或女性不孕的重要原因。本课题拟观察转化生长因子β1（transforming growth factorβ1,TGFβ1）与早发性卵巢功能不全（premature ovarian insufficiency,POI）疾病的相关性,并探索TGFβ1通路对颗粒细胞增殖凋亡的影响以及KMT5C-H4K20me3轴在其中扮演的角色。为完善卵巢衰老的表观遗传机制增添新资料,也为重塑和保护卵巢功能提供潜在的分子靶标。方法1.收取临床早发性卵巢功能不全和卵巢功能正常患者的卵泡液标本,ELISA检测TGFβ1的表达水平,Western blot检测沉淀（主要为颗粒细胞蛋白提取物）TGFβ1蛋白表达量;2.利用环磷酰胺（120 mg/kg）和白消安（30 mg/kg）联合腹腔注射建立POI小鼠模型,q-PCR和Western blot检测卵巢TGFβ1表达变化,IHC检测TGFβ1表达定位;3.分离小鼠卵巢颗粒细胞并进行体外培养,使用TGFβ1小干扰RNA（si-TGFβ1）转染48 h后,分别行EDU和FITC/PI双染检测颗粒细胞的增殖和凋亡情况,q-PCR和Western blot检测细胞凋亡相关基因和激素调控酶变化,ELISA测定培养上清Pg、E2和AMH含量;4.将si-TGFβ1与人卵巢颗粒细胞共孵育48 h后,分别行EDU和FITC/PI双染检测颗粒细胞的增殖和凋亡情况,q-PCR和Western blot检测细胞凋亡相关基因和激素调控酶变化,ELISA测定培养上清Pg、E2和AMH含量;5.Western blot检测si-TGFβ1干扰小鼠颗粒细胞和人KGN细胞后H4K20me3表达变化,同步q-PCR和Western blot检测其调控酶KMT5C的表达变化;6.KMT5C抑制剂A-196与小鼠颗粒细胞共孵育48 h后,Western blot检测颗粒细胞H4K20me3表达变化,并分别使用EDU和FITC/PI双染检测细胞增殖和凋亡情况,q-PCR和Western blot检测颗粒细胞增殖凋亡相关基因和激素调控酶变化,测定培养上清Pg、E2和AMH含量。结果1.ELISA结果显示,较正常组相比,POI患者卵泡液中TGFβ1量显著减少,颗粒细胞沉渣TGFβ1蛋白表达显著减少（P＜0.001）;2.Q-PCR和WB结果显示,POI小鼠卵巢组织TGFβ1 mRNA和蛋白表达亦显著减少（P＜0.01）;IHC结果显示TGFβ1广泛分布于小鼠卵巢组织,且在各级卵泡细胞胞质和胞核上均有表达;3.EDU显示沉默TGFβ1后颗粒细胞增殖率下降（P＜0.05）,FITC/PI双染显示颗粒细胞凋亡增多,q-PCR和WB结果显示Bax/Bcl2蛋白和mRNA水平显著上升（P＜0.05）,CYP11a1和CYP19a1 mRNA水平显著下降（P＜0.01）;ELISA结果显示颗粒细胞分泌Pg、E2和AMH显著减少（P＜0.05,P＜0.01）;4.小干扰RNA沉默TGFβ1表达后,EDU显示KGN增殖率下降（P＜0.01）,FITC/PI双染显示KGN凋亡增多,q-PCR和WB结果显示Bax/Bcl2蛋白和mRNA水平显著上升（P＜0.05,P＜0.01）,CYP11a1和CYP19a1 mRNA水平显著下降（P＜0.001）,ELISA结果显示,KGN分泌Pg、E2和AMH显著减少（P＜0.05,P＜0.01）;5.TGFβ1下调后,小鼠颗粒细胞和KGN H4K20me3蛋白表达下降（P＜0.05,P＜0.01）,其调控酶KMT5C蛋白和mRNA表达显著下降（P＜0.05,P＜0.01）;6.A-196抑制KMT5C并下调H4K20me3表达后,EDU显示小鼠颗粒细胞增殖率下降（P＜0.05）,FITC/PI双染显示小鼠颗粒细胞凋亡增多,q-PCR和WB结果显示Bax/Bcl2 mRNA和蛋白水平显著上升（P＜0.05,P＜0.01）,PCNA mRNA和蛋白表达显著上升（P＜0.05,P＜0.01）,CYP11a1和CYP19a1 mRNA水平显著下降（P＜0.01）,ELISA结果显示小鼠颗粒细胞分泌Pg、E2和AMH显著减少（P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001）。结论1.早发性卵巢功能不全与TGFβ1通路异常密切相关;2.组蛋白翻译后修饰KMT5C-H4K20me3调控轴在卵巢颗粒细胞增殖凋亡及关键激素分泌中起重要调节作用;3.TGFβ1可能通过KMT5C-H4K20me3轴影响颗粒细胞功能致卵巢早衰。
其他文献
癌症已经严重威胁人类健康和生命安全,随着生物医学技术的飞速发展,肿瘤免疫疗法已在多种癌症中成功应用,但肿瘤微环境中大量的浸润性Treg细胞会阻碍肿瘤免疫疗法的效果。趋化因子受体CCR8在肿瘤浸润Treg细胞上特异性表达,靶向CCR8可以选择性耗竭肿瘤浸润Treg细胞,从而增强免疫应答,因此CCR8是极具潜力的肿瘤治疗靶点,对CCR8进行结构生物学研究能够加速相关抗肿瘤新药的研发。本研究一方面将利用
研究背景和目的:抑郁症致死率仅次于癌症,将成为第二大疾病,导致人类死亡和残疾。抑郁症患者可出现精神病性症状,持续时间较长且反复发作,严重影响患者正常生活,现在仍未有确切的方法来调控抑郁症。因此,进一步明确抑郁症发生发展机制,寻求更合理治疗方案,从而改善抑郁症,具有重要意义。抑郁症病理生理学特点是抑制大脑γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）能神经、功能和神经化学出现异常,
背景:幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,H.pylori）作为一种全球流行的人类病原体,是导致胃溃疡乃至胃癌的重要风险因子之一。清除幽门螺杆菌感染有助于预防胃部疾病的发生。近年来,幽门螺杆菌的耐药性风险越来越高使得抗生素治疗策略存在隐患。疫苗成为了防控幽门螺杆菌感染的新选择,然而,迄今为止仍没有一款疫苗进入临床应用。探寻新颖高效的疫苗研发策略不仅需要筛选鉴定能够诱导高效免疫保护的
目的:B细胞由骨髓中造血干细胞（Hematopoietic stem cells,HSCs）发育,经共同淋巴祖细胞（Common lymphoid progenitor,CLPs）分化而来,成熟B细胞通过分泌抗体参与体液免疫调节,维持机体稳态。HEM1（Hematopoietic protein 1,HEM1）蛋白是WAVE2复合体的重要组成成员,其属于Nck相关蛋白并与激活的Rac相互作用调节细
研究背景:肝纤维化是肝脏对反复持续的炎症或其他损伤的修复反应,最终导致细胞外基质（extracellular matrix,ECM）过度沉积的病理过程。ECM主要由活化的肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSC）生成,HSC活化是肝纤维化形成的中心环节。肝纤维化和肝硬化是肝脏疾病晚期的共同病理归属,严重威胁着人类健康。如何有效缓解或抑制肝纤维化进程是治疗慢性肝脏疾病的关键。虽
目的:邻苯二甲酸二异壬酯（di-isononyl phthalate,DINP）是一种高分子量的邻苯二甲酸酯,主要用于商业、工业和医疗产业中。由于其毒性较低,常作为邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（di-（2-ethylhexyl）phthalate,DEHP）的替代品,近几年DINP的应用越来越广泛。据报道,DINP暴露可对人体内分泌系统、消化系统、神经系统、泌尿系统以及生殖系统造成损害,尤其是男
作为一种广谱的抗肿瘤药物,顺铂（Cisplatin,CIS）被广泛应用于各种恶性肿瘤的临床治疗当中。顺铂化疗耐药现象的频繁发生严重影响了肿瘤化疗的治疗效果,是亟待解决的临床问题。甘油激酶（Glycerol Kinase,GK）是催化游离甘油磷酸化的关键酶,直接调控细胞对于游离甘油的利用能力。团队前期研究发现在膳食源性染料木素拮抗顺铂化疗的过程中,乳腺癌细胞内GK表达出现显著上调。本研究旨在明确GK
孤独症谱系障碍（ASD）是一种神经发育障碍性疾病,在过去的几十年里,ASD的发病率急剧上升。近年来,虽然进行了大量的研究,但对ASD的病因和病理机制仍知之甚少,尚无针对核心症状的药物和治疗方法。ASD具有很强的遗传性,已经发现了大量的风险基因,还有许多非遗传因素,如环境、代谢和免疫等。肠道是整合这些遗传和非遗传因素的重要场所,但肠道如何在ASD的病因和病理中发挥作用,尚待深入研究。越来越多的证据表
研究背景和目的:人类免疫缺陷病毒（HIV）感染已成为严重威胁人类健康的全球性问题,获得性免疫缺陷综合征（Acquired immunodeficiency syndrome,AIDS）相关并发症,如心血管疾病引起的死亡人数正在逐年增加,成为艾滋病患者死亡的重要威胁。HIV-1包膜糖蛋白gp120作为HIV的致病蛋白,可以产生与HIV相似的神经性病变。研究表明,HIV感染导致的心血管疾病与交感活性相
我国正处于政府转型的重要时期,近年来政府行政服务管理范围不断扩大,公有公共设施的不断完善正是服务型政府服务公众的具体表现之一。公有公共设施建设的不断完善的同时,由于设置或管理上的缺陷导致侵权案件也变得越来越频繁。但是在我国现行的法律规范中,仅《民法典》在侵权责任编中明确规定了建筑物、构筑物及物上设施致害侵权赔偿责任,《国家赔偿法》则是采行为与权利并行模式,并未把公有公共设施致害赔偿归入到国家赔偿案