核酸酶P1是由桔青霉发酵生产的一种含锌金属酶,主要用于工业生产核苷酸,但国内的核酸酶P1产率和纯度均不高,大量的依赖进口。本论文主要对由桔青霉发酵生产的核酸酶P1进行分离纯化,在此基础上研究了纯化后核酸酶P1的酶学特性,并进一步对核酸酶P1作为工具酶应用于基因工程领域进行了探究。经研究得核酸酶P1的主要分离技术为:粗酶液先进行热处理,硫酸铵分级沉淀,透析,再进行葡聚糖凝胶G75过滤层析、DEAE-纤维素52离子交换层析和葡聚糖凝胶过滤层析得到核酸酶P1纯酶液。经过整个纯化过程,总酶活回收率约20-30%,核酸酶P1被纯化了3.05倍,通过SDS-PAGE检测为分子量约36 kDa的单一条带。对核酸酶P1的酶学特性研究表明,核酸酶P1的最适反应温度为70℃,在70℃处理1 h,酶活回收率为87%。最适的反应缓冲体系是pH 5.4的醋酸缓冲液。低浓度Zn²⁺、Mg²⁺和Ca²⁺能轻微促进核酸酶P1的酶活,高浓度的金属离子对核酸酶P1具有抑制作用,Cu²⁺和Fe³⁺的抑制效果最为明显。核酸酶P1的米氏常数Km值为19.40 mmol/L,最大反应速率Vmax值为3.23 mmol/（mL·min）。其拟合的相关度R²达到了0.9925。研究添加剂对核酸酶P1保存稳定性的影响发现,在核酸酶P1酶液中添加15%（w/v）的蔗糖或0.1%（w/v）的山梨酸钾,在4℃下保存一个月基本完全失活,而4℃下其他添加剂的酶活都维持在90%以上。将核酸酶P1用于降解DNA中污染的RNA,通过琼脂糖凝胶电泳检测,表明核酸酶P1对大肠杆菌基因组DNA中的RNA污染具有一定的消化效果。这对我国获取核酸酶P1纯酶液,减少进口依赖性,提高我国核苷酸的生产效率以及进一步拓展核酸酶P1的应用起到了良好的促进作用。