2013年,我国台湾报道了首例人感染H6N1亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)病例,表明H6亚型AIV具有感染人的潜在风险。在家禽AIV流行病学调查过程中,也经常会分离到H6亚型AIV。为了进一步了解我国H6亚型AIV的遗传演化规律及其相关生物学特性,本研究对2014-2016年我国部分地区分离的105株H6亚型AIV进行了表面基因序列的测定,并选择18株进行全基因组序列分析及抗原性差异分析,并对病毒感染哺乳动物的风险进行评估,为禽流感防控提供数据支持。1.H6亚型AIV 2014-2016年分离株的遗传演化分析为了研究H6亚型AIV的遗传进化情况,对我国部分地区2014-2016年分离的105株H6亚型AIV的HA和NA基因进行序列测定,根据毒株不同的分离时间、地点、宿主、HA基因的同源性以及HA和NA亚型组合不同等,选择18株H6亚型AIV进行纯化和全基因组序列测定。结果显示,我国2014-2016年H6亚型AIV以H6N6亚型组合为主,H6N2、H6N1、H6N4和H6N8多种亚型共存。18株H6亚型AIV的八个基因片段在进化树上呈现多个分支,不同分支之间毒株的基因差异较大,呈现出明显的遗传多样性;不同病毒的内部基因来源复杂多样,与多个其他亚型AIV存在基因重排现象,以基因核苷酸同源性≥95%为基因型划分标准,可将18株病毒株划分成15种基因型。结果表明,我国2014-2016年H6亚型AIV存在遗传进化的多样性和复杂性。2.H6亚型AIV 2014-2016年分离株的抗原差异性分析将18株H6亚型AIV用β-丙内酯进行灭活后,超滤管浓缩病毒,使其血凝效价≥28。浓缩后的病毒与佐剂按9:1的比例混合,震荡乳化后制备灭活疫苗,以1ml/只的剂量对6周龄SPF鸡进行肌肉多点注射免疫,免疫后28天采血进行血清分离,免疫血清与18株病毒进行交叉血凝抑制试验。结果显示,病毒之间交叉反应性和抗原性与病毒的HA基因同源性有关,HA基因同源性越高,病毒之间的交叉反应性越好,抗原性差异也越小,而不同HA基因分支内的病毒之间交叉反应性较差,抗原性差异显著,有些病毒之间甚至无反应性。因此,我国2014-2016年H6亚型AIV存在抗原多样性,共分为4个抗原群。3.H6亚型AIV 2014-2016年分离株的小鼠致病性研究6周龄BALB/c雌性小鼠用干冰轻微麻醉后,将18株H6亚型AIV以106EID50/50μL剂量经鼻腔进行感染,每株病毒感染8只小鼠,对照组5只小鼠用相同方式接种50μL PBS。接种后3天对感染组小鼠随机挑选3只剖杀,无菌采集其脑、鼻甲、脾脏、肾脏和肺脏,脏器匀浆后取上清接种10日龄鸡胚进行病毒滴度测定,对照组和感染组剩余小鼠连续观察14天,每天记录体重变化情况。结果显示,我国H6亚型AIV 2014-2016年分离株对小鼠呈低致病力,大多数病毒感染小鼠后3-5天出现一过性体重下降后,体重逐渐恢复正常,脏器病毒滴定结果显示,大多数病毒在没有预先适应的情况下可在小鼠肺脏中有效复制,个别病毒在小鼠鼻甲中也能进行高效复制,表明H6亚型AIV具有一定的感染哺乳动物的潜在风险。