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本论文针对目前脲类除草剂残留分析问题,开展了异丙隆农药的免疫分析技术研究。主要内容包括异丙隆人工抗原合成、多克隆抗体制备和相应的ELISA检测方法的建立。1.人工抗原的合成及鉴定以N-甲基吡咯环酮为反应起始原料,碱性条件下水解制得中间产物N-甲基丁酸,然后与对异丙基苯异氰酸酯反应得半抗原Hapten4C【1-(3-丙基羧基)-3-(4-异丙基苯基)-1-甲基脲】;以N-甲基己内酰胺为反应起始原料,酸性条件下水解制得中间产物N-甲基已酸,然后与对异丙基苯异氰酸酯反应,制得另一半抗原Hapten6C【1-(5-戊基羧基)-3-(4-异丙基苯基)-1-甲基脲】。以红外、核磁共振H1NMR、薄层色薄、熔点测定鉴定所制半抗原的化学结构。两半抗原以活性酯法分别与牛血清蛋白和卵清蛋白偶联,制得免疫原Hapten6C-BSA及包被原Hapten4C-OVA。对合成的人工抗原进行紫外光谱鉴定(偶联比分别为1:46、1:36)。2.多克隆抗体的制备免疫动物制备特异性抗体:用免疫原Hapten6C-BSA分别免疫三只新西兰大白兔(编号A4746、A5051、A5205),采用背部皮下多点注射法经过六次免疫制得异丙隆抗血清,效价分别为1:160000、1:80000、1:20000。3.异丙隆ELISA试验条件比较两种包被原Hapten4C-OVA、Hapten6C-OVA对检测灵敏度的影响,以Haptan6C-OVA包被测得的抑制中浓度(I50)为500ng/mL,以Haptan4C-OVA包被测得的抑制中浓度(I50)值为70ng/mL,两者具有显著差别。以A4746抗血清和包被原Hapten4C-OVA建立间接竞争酶免疫分析法。4.异丙隆ELISA法分析标准曲线及特异性异丙隆酶联免疫测定法的回归方程I = (22.888+ 0.043C0.744)/(24.067+C0.744),抑制中浓度I50=70ng/mL,最低检测限(I10)为5ng/mL。抗体对甲醇有一定耐受能力,待测样品中甲醇含量不易超过10%。抗体对异丙隆具有高度的特异性,与其它六种脲类除草剂氯溴隆、绿谷隆、特丁塞隆、赛苯隆、草不隆、伏草隆的交叉反应率低于0.1%。5.样品回收率的测定