芪术颗粒对肝纤维化形成过程中PI3K/AKT信号转导通路的影响

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[目的]本课题将研究芪术颗粒对VEGF介导的PI3K/Akt信号转导通路的影响,以进一步阐释芪术颗粒“化瘀通络”作用抗肝纤维化的机理。[方法]、Vaster大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、实验对照组和芪术颗粒组,每组40只。用CCL4复制肝纤维化模型,同时给予芪术颗粒预防灌胃,分别于造模后的第3天、1周、2周、4周时间点各组取10只大鼠肝组织,用免疫组化法(IHC)检测肝细胞Co-Ⅳ、LN、α-SMA的表达,实时荧光法定量PCR方法检测VEGFmRNA的表达,同时用Western blot免疫印迹法检测KDR、P13K、p-Akt(Ser473).Bad(Serl36)、 caspase-3蛋白的表达。[结果]1.芪术颗粒对α-SMA、Co-Ⅳ、LN沉积的影响正常对照组大鼠肝组织α-SMA、Co-Ⅳ、LN染色呈弱阳性表达,模型对照组大鼠肝组织α-SMA.Co-Ⅳ、LN染色呈强阳性。且随实验时间延长,芪术颗粒组大鼠肝组织α-SMA IOD值较对应时间点模型对照组显著降低(7.063±0.049vs7.169±0.027;7.501±0.046vs7.870±0.033;8.017±0.016vs8.295±0.045;8.983±0.027vs9.970±0.542,P<0.05)。芪术颗粒组大鼠肝组织Co-Ⅳ IOD值较对应时间点模型对照组显著降低(3.256±0.040vs3.447±0.041;3.590±0.030vs3.768±0.031;3.940±0.042vs4.161±0.027;4.916±0.055vs6.361±0.475,P<0.05)。芪术颗粒组大鼠肝组织LN IOD值较对应时间点模型对照组显著降低(3.239±0.038vs3.339±0.027;3.527±0.027vs3.715±0.019;3.881±0.028vs4.119±0.024;4.531±0.025vs4.856±0.081,P<0.01)。2.芪术颗粒对VEGF mRNA表达的影响在第4周时间点时,芪术颗粒组较模型对照组ct比值显著升高(1.304±0.037vs1.265±0.028,P<0.05)。3.芪术颗粒对PI3K/Akt及其下游相关蛋白表达的影响在第1周时间点时,模型对照组较正常对照组大鼠肝组织KDR蛋白表达量显著增加(0.821±0.068vs0.438±0.022,p<0.01)。在第1周时间点时,芪术颗粒组较模型对照组KDR表达量显著下降,有统计学意义(0.604±0.116vs0.821±0.068,p<0.01)。在第1周时间点时,模型对照组较正常对照组大鼠肝组织P13K蛋白表达量显著增加(0.623±0.032vs0.441±0.030,p<0.01)。在第2周时间点时,模型对照组较正常对照组大鼠肝组织P13K蛋白表达量显著增加(0.714±0.049vs0.494±0.008,p<0.01)。在第2周、第4周时间点时,模型对照组较正常对照组大鼠肝组织p-Akt(Ser473)蛋白表达量显著增加(0.667±0.026vs0.509±0.032;0.972±0.095vs0.518±0.044,p<0.01)。在第2周、第4周时间点时,芪术颗粒组较模型对照组大鼠肝组织p-Akt(Ser473)蛋白表达量显著下降(0.553±0.034vs0.667±0.026;0.616±0.052vs0.972±0.095,p<0.01)。在第4周时间点时,模型对照组较正常对照组及实验对照组大鼠肝组织Bad(Serl36)蛋白表达量显著增加(0.845±0.150vs0.571±0.098;0.845±0.150vs0.627±0.037,p<0.01)。在第1周、第2周、第4周时间点时,模型对照组较正常对照组大鼠肝组织caspase-3蛋白表达量显著增加(0.750±0.041vs0.475±0.060;0.623±0.016vs0.474±0.078;0.848±0.124vs0.481±0.043,p<0.01)。在第1周、第4周时间点时,芪术颗粒组较模型对照组大鼠肝组织caspase-3蛋白表达量显著下降(0.611±0.061vs0.750±0.041;0.552±0.113vs0.848±0.124,p<0.01)。[结论]芪术颗粒对P13K/AKT信号传导通路的激活有调控作用,以减少α-SMA.Co-Ⅳ、LN在肝窦壁的沉积,抑制肝纤维化的发生和发展。
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