慢性免疫系统异常激活是人免疫缺陷病毒(Human immunodificiency virus, HIV)感染的重要特征。HIV感染后,机体免疫系统不能清除HIV,相反却引起广泛的非特异性T细胞激活。这种激活可逐渐消耗初始记忆T细胞,导致CD4+T细胞急剧减少并加速HIV疾病进程。随着抗逆转录病毒疗法(Antiretroviral therapy, ART)的临床应用,HIV感染者的发病率和死亡率大幅度下降。尽管ART能有效地控制HIV在体内复制,但是病人体内的慢性免疫激活和系统性炎症依然存在。因此,干预HIV感染相关的免疫激活和炎症是当前艾滋病研究的热点。本项工作基于绿茶多酚EGCG具有抗炎抗氧化及抗病毒感染的性能,研究了EGCG是否能在体外体内抑制艾滋病毒(HIV和SIV)感染。在此基础上,我们利用猴艾滋病毒(Simian immunodificiency virus SIV)感染中国恒河猴模型,探讨了EGCG能否拮抗细菌脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)介导的慢性免疫激活和降低T细胞的活化；更重要的是,我们研究了EGCG是否能阻断艾滋病毒通过直肠黏膜感染及其机制,为临床使用EGCG预防和辅助治疗HIV感染提供科学依据。1. HIV/SIV诱导机体产生慢性免疫激活慢性免疫激活是HIV感染进展到AIDS的重要标志之一。为检验SIV感染恒河猴模型能否模拟人类感染HIV的疾病进程,我们检测了SIV慢性感染的恒河猴的免疫激活情况。结果显示,与HIV感染一致,SIV/SHIV感染能造成免疫激活,消耗(deplete)外周和肠道相关淋巴组织中(Gut-associated lymphoid tissue, GALT)的CD4+T细胞,其中肠道淋巴结(Lymph nodes, LNs)及上皮内淋巴细胞(intraepithelial lymphocytes, IEL)消耗更为突出。我们比较了HIV/SIV感染对机体免疫激活的影响,结果发现,SIV感染能引起外周和肠道LN中T细胞持续性的免疫激活(CD69+, HLA-DR+),同时促进T细胞的增殖(Ki-67+)。与外周血及外周LN相比,肠道LN中病毒载量较高,同时也出现较强的炎症反应。同时我们研究发现,与HIV感染人类相似,大多数SIV感染的中国恒河猴生存周期长,可存活3-4年不发展为AIDS。在感染末期,恒河猴会出现于人类AIDS相似的症状,如严重腹泻,肿瘤,神经艾滋症状(站立不稳,精神恍惚),表明我们建立的SIV感染中国恒河猴模型更加适合HIV感染的相关研究。2. EGCG抑制炎症反应和免疫激活肠道微生物移位(Microbial translocation)是诱导HIV/SIV相关炎症反应和免疫激活的主要因素。LPS作为肠道微生物的主要产物,通过受损的肠道黏膜屏障,可以诱导细胞免疫激活,产生大量的炎性因子。绿茶多酚EGCG具有消除自由基、抗氧化等生物活性,我们进一步研究了EGCG在病毒感染或微生物移位情况下的抗炎作用。结果发现,EGCG能在免疫和非免疫细胞中显著抑制LPS诱导的炎症反应(TNF-a,IL-1p和IL-6)和氧化应激(ROS和iNOS),同时也能抑制单核／巨噬细胞的免疫激活(CD38+)。EGCG处理大鼠,能有效抑制LPS刺激诱导的炎性因子的表达。SIV感染恒河猴连续8周服用EGCG,能有效降低机体内炎性因子的水平。3. EGCG抑制SHIV直肠黏膜感染中国恒河猴体外实验表明,EGCG对具有包膜蛋白的病毒有广泛的抑制作用,能竞争性抑制靶细胞表面受体与病毒结合,进而阻止病毒进入靶细胞。因此,我们研究了EGCG对HIV/SIV的抑制效果。结果显示,EGCG及其类似物在非毒性的浓度下,能有效地抑制艾滋病毒(HIV, SHIV和SIV)的感染和复制,EGCG的抑制效果最佳,且具有量效关系。EGCG能显著地抑制HIV-1Bal在人巨噬细胞中的复制,也明显地抑制SHIVSF162P3N在猴巨噬细胞和淋巴细胞的复制。为了研究EGCG体内抗病毒的作用,满足不同研究内容的需求,我们接着建立了静脉、阴道、直肠黏膜方式的SIV/SHIV感染中国恒河猴模型。感染后2-3周,血浆病毒载量达到高峰,同时外周血CD4+T细胞急剧下降,随后病毒载量和CD4+T细胞趋于稳定,进入慢性感染期,该动物模型呈现出与人类感染HIV相类似的病毒学和免疫学特征。在此基础上,我们利用SHIV直肠感染中国恒河猴模型进一步检测了EGCG预防性传播的效果。研究表明,连续8次低剂量直肠攻毒,对照组8只恒河猴血浆病毒RNA及特异性抗体均为阳性,全部被感染；而EGCG处理组仅有1只阳性。检测组织中proviral DNA发现,对照组8只恒河猴的所有组织(外周血,淋巴结及肠道)均存在SHIV proviral DNA,而EGCG处理组动物血浆病毒阴性的7只恒河猴均为阴性,进一步证实EGCG的保护效果。统计分析表明,EGCG直肠处理能将单次暴露感染风险降低91.5%(P=0.0009),经过8次直肠攻毒,EGCG能保护87.5%的恒河猴不被SHIV感染,两组差异极显著(P=0.001)。探讨EGCG保护机制发现,EGCG能竞争性地抑制HIV包膜蛋白gp120与CD4受体结合,同时EGCG处理能有效减少直肠黏膜巨噬细胞的聚集和激活(CD163+和HLA-DR+)。