论文部分内容阅读
目的：胶质瘤是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤，复发率高、预后差，严重威胁人类健康。LRIG1（(Leucine rich repeats and immunoglobulin like domain protein 1，富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域蛋白1）可负性调控脑胶质瘤中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)信号转导通路从而抑制肿瘤的生长。小激活RNA(small activating RNA，saRNA)是新近发现能够激活基因表达的小分子RNA。本课题拟针对LRIG1启动子区设计并筛选一种新的小激活RNA（dsLRIG1），研究具有激活作用的 dsLRIG1 对脑胶质瘤细胞在生长和侵袭转移的抑制作用，为治疗脑胶质瘤提供新的有效途径。 方法：(1)根据文献报告设计3种特异性靶向LRIG1基因启动子区的saRNA：dsLRIG1-393，dsLRIG1-365和dsLRIG1-712。将dsLRIG1分别转染至人脑胶质瘤U251和U87细胞72h后，通过半定量PCR、Western Blot和细胞免疫荧光的方法筛选能够上调LRIG1 mRNA和蛋白表达的小激活RNA。(2)利用流式细胞技术检测dsLRIG1对脑胶质瘤细胞周期和凋亡的影响，利用Transewell实验检测dsLRIG1对胶质瘤细胞侵袭转移的影响。 结果：(1) 设计并筛选得到dsLRIG1-712，该saRNA能上调胶质瘤U251、U87细胞中LRIG1 mRNA和蛋白表达水平，表明dsLRIG1-712能特异性激活U251和U87细胞中LRIG1基因表达;(2) 转染细胞后，dsLRIG1-712能抑制脑胶质细胞的增殖能力和迁移能力，且这种抑制作用与激活LRIG1的表达有关。本实验中发现,与对照组相比dsLRIG1-712能促进细胞凋亡，未发现dsLRIG1-712对细胞有明显的周期抑制作用。 结论：成功设计和筛选出一种能靶向激活LRIG1基因表达的saRNA (dsLRIG1-712)。该saRNA能有效抑制脑胶质瘤细胞的增殖与迁移，并诱导细胞凋亡。本研究结果为以LRIG1作为靶点的脑胶质瘤基因治疗提供了新的实验依据和途径。