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本文从以下几部分进行论述: 第一章:大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养与鉴定 目的:体外培养活性好、纯度高的骨髓间充质干细胞。 方法:采用密度梯度离心法分离培养骨髓间充质干细胞,采用流式细胞仪鉴定其表面抗原的表达情况,用成软骨试剂、成脂试剂诱导BMSCs分化成软骨细胞、脂肪细胞。 结果:获得细胞具有明显的贴壁性,其细胞表面高表达CD44、CD90、CD29抗原分子,低表达CD45、CD34、CD11b抗原分子。成软骨诱导分化3周,BMSCs即可分化成软骨细胞,成脂诱导分化2周,即可分化成脂肪细胞。 结论:密度梯度离心法可以获得活性好、纯度高、具有多向分化潜能的BMSCs。 第二章:大鼠脂肪变供肝肝移植模型的建立 目的:建立脂肪变供肝肝移植模型。 方法:通过高脂饮食8周建立脂肪肝模型,采用在kamada肝移植模型的基础上,改进手术方法,预实验50对,正式实验40对,观察手术成功率,并分别于术前1天、术后1天、术后3天、术后5天、术后7天、术后12天分别抽血,观察谷草转氨酶、白蛋白等指标的变化规律。 结果:通过预实验获得较高的模型成功率,正式实验40对大鼠肝移植手术成功率为90%,术后谷草转氨酶、白蛋白短暂升高后逐渐恢复。 结论:成功建立了稳定的大鼠脂肪变供肝肝移植模型。 第三章:骨髓间充质干细胞在移植肝中的定居 目的:探讨BMSCs在移植肝中的定居情况 方法:分别采用DAPI、慢病毒行骨髓间充质干细胞标记,选用标记速率快、效果好的标记物标记后,于肝移植过程中,门静脉套管前行BMSCs输注,分别于术后7d、12d,取病理切片荧光显微镜下观察其定居情况 结果:浓度为1.5ul/L的DAPI与细胞共培养标记12h后,在荧光倒置显微镜下观察其细胞蓝光标记率达95%左右。含有绿色荧光蛋白基因的慢病毒与干细胞共培养12h后,BMSCs的荧光表达很低,继续感染1天后其荧光标记率才达到40%左右。采用DAPI标记BMSCs输注移植肝后,7d、12d都可观察到标记的BMSCs,但荧光强度逐渐减弱。 结论:BMSCs能够成功定居在移植的肝脏中 第四章:骨髓间充质干细胞对重度脂肪变供肝肝移植术后肝功能的影响 目的:探讨BMSCs能否对重度脂肪变供肝肝移植术后肝功能起到保护作用 方法:实验分干细胞组和对照组两组,每组行肝移植30只,对照组于门静脉套管前输注平衡盐溶液1ml,干细胞组于门静脉套管前输注BMSCs1ml,分别于术后1d、3d、5d、7d处死5只,检测肝功能AST、ALT、ALB、TB指标,每组剩余10只观察术后的大鼠的生存情况。 结果:对照组组和干细胞组术后1d、3d、5d、7d的肝功能指标的比较如下:AST指标分别为1040±61.1、1196.75±104.4、1221.5±96.2、1330.25±55.1和1115±63.3、970±64.2、1069±67.8、1150.25±102.5U/L。其中3d、5d、7d数据差异具有统计学意义,(P<0.05)。1d数据差异无统计学意义,(P>0.05)ALT指标分别为911.75±61.9、1044.25±63.4、1191±190.4、1285.25±191和1096.25±97.7、1267.25±162.9、959±99.5、1051.5±110.5U/L。其中1d、3d、5d、7d数据差异具有统计学意义(P<0.05)。TB指标分别为4.05±1.34、7.53±1.8、8.73±0.26、9.42±0.33和5.48±0.33、6.53±0.21、7.13±0.26、7.78±0.34U/L。其中1d、3d数据差异无统计学意义(P>0.05),5d、7d数据差异具有统计学意义(P<0.05)。ALB指标分别为21.75±1.7、20.75±1.7、20.5±2.1、15.75±2.2和22±1.8、21.5±0.58、21±0.71、19.5±0.74U/L。其中1d、3d、5d数据差异无统计学意义(P>0.05),7d数据差异具有统计学意义(P<0.05)。干细胞组10只肝移植大鼠1d、3d、7d、14d时死亡率分别为0%、20%、50%、70%。对照组10只肝移植大鼠1d、3d、7d、14d时死亡率分比为10%、40%、70%、90%。 结论:联合BMSCs移植有利于减轻重度脂肪变供肝肝移植术后肝功能的损害,能够延缓重度脂肪变供肝肝移植术后大鼠的死亡时间,但对大鼠的长期生存的影响还有待进一步的研究。