骨髓间充质干细胞对重度脂肪变供肝肝移植术后肝功能影响的实验研究

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本文从以下几部分进行论述:  第一章:大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养与鉴定  目的:体外培养活性好、纯度高的骨髓间充质干细胞。  方法:采用密度梯度离心法分离培养骨髓间充质干细胞,采用流式细胞仪鉴定其表面抗原的表达情况,用成软骨试剂、成脂试剂诱导BMSCs分化成软骨细胞、脂肪细胞。  结果:获得细胞具有明显的贴壁性,其细胞表面高表达CD44、CD90、CD29抗原分子,低表达CD45、CD34、CD11b抗原分子。成软骨诱导分化3周,BMSCs即可分化成软骨细胞,成脂诱导分化2周,即可分化成脂肪细胞。  结论:密度梯度离心法可以获得活性好、纯度高、具有多向分化潜能的BMSCs。  第二章:大鼠脂肪变供肝肝移植模型的建立  目的:建立脂肪变供肝肝移植模型。  方法:通过高脂饮食8周建立脂肪肝模型,采用在kamada肝移植模型的基础上,改进手术方法,预实验50对,正式实验40对,观察手术成功率,并分别于术前1天、术后1天、术后3天、术后5天、术后7天、术后12天分别抽血,观察谷草转氨酶、白蛋白等指标的变化规律。  结果:通过预实验获得较高的模型成功率,正式实验40对大鼠肝移植手术成功率为90%,术后谷草转氨酶、白蛋白短暂升高后逐渐恢复。  结论:成功建立了稳定的大鼠脂肪变供肝肝移植模型。  第三章:骨髓间充质干细胞在移植肝中的定居  目的:探讨BMSCs在移植肝中的定居情况  方法:分别采用DAPI、慢病毒行骨髓间充质干细胞标记,选用标记速率快、效果好的标记物标记后,于肝移植过程中,门静脉套管前行BMSCs输注,分别于术后7d、12d,取病理切片荧光显微镜下观察其定居情况  结果:浓度为1.5ul/L的DAPI与细胞共培养标记12h后,在荧光倒置显微镜下观察其细胞蓝光标记率达95%左右。含有绿色荧光蛋白基因的慢病毒与干细胞共培养12h后,BMSCs的荧光表达很低,继续感染1天后其荧光标记率才达到40%左右。采用DAPI标记BMSCs输注移植肝后,7d、12d都可观察到标记的BMSCs,但荧光强度逐渐减弱。  结论:BMSCs能够成功定居在移植的肝脏中  第四章:骨髓间充质干细胞对重度脂肪变供肝肝移植术后肝功能的影响  目的:探讨BMSCs能否对重度脂肪变供肝肝移植术后肝功能起到保护作用  方法:实验分干细胞组和对照组两组,每组行肝移植30只,对照组于门静脉套管前输注平衡盐溶液1ml,干细胞组于门静脉套管前输注BMSCs1ml,分别于术后1d、3d、5d、7d处死5只,检测肝功能AST、ALT、ALB、TB指标,每组剩余10只观察术后的大鼠的生存情况。  结果:对照组组和干细胞组术后1d、3d、5d、7d的肝功能指标的比较如下:AST指标分别为1040±61.1、1196.75±104.4、1221.5±96.2、1330.25±55.1和1115±63.3、970±64.2、1069±67.8、1150.25±102.5U/L。其中3d、5d、7d数据差异具有统计学意义,(P<0.05)。1d数据差异无统计学意义,(P>0.05)ALT指标分别为911.75±61.9、1044.25±63.4、1191±190.4、1285.25±191和1096.25±97.7、1267.25±162.9、959±99.5、1051.5±110.5U/L。其中1d、3d、5d、7d数据差异具有统计学意义(P<0.05)。TB指标分别为4.05±1.34、7.53±1.8、8.73±0.26、9.42±0.33和5.48±0.33、6.53±0.21、7.13±0.26、7.78±0.34U/L。其中1d、3d数据差异无统计学意义(P>0.05),5d、7d数据差异具有统计学意义(P<0.05)。ALB指标分别为21.75±1.7、20.75±1.7、20.5±2.1、15.75±2.2和22±1.8、21.5±0.58、21±0.71、19.5±0.74U/L。其中1d、3d、5d数据差异无统计学意义(P>0.05),7d数据差异具有统计学意义(P<0.05)。干细胞组10只肝移植大鼠1d、3d、7d、14d时死亡率分别为0%、20%、50%、70%。对照组10只肝移植大鼠1d、3d、7d、14d时死亡率分比为10%、40%、70%、90%。  结论:联合BMSCs移植有利于减轻重度脂肪变供肝肝移植术后肝功能的损害,能够延缓重度脂肪变供肝肝移植术后大鼠的死亡时间,但对大鼠的长期生存的影响还有待进一步的研究。
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