论文部分内容阅读
目的:本论文研究肾虚骨质疏松症大鼠股骨、肾、下丘脑组织OPG/RANKL相关蛋白的活性变化,解析破骨细胞的分化、调节及信号传导,阐明肾虚骨质疏松症证候病机的分子生物学基础;补肾中药进行干预后,通过调控上述蛋白的活性变化,为临床防治骨质疏松症的合理用药提供科学的实验依据。材料与方法:去卵巢方法建立肾虚骨质疏松症大鼠模型,应用补肾填精、壮骨益髓的中药复方进行干预,正常大鼠作为标准对照,模型大鼠作为空白对照,同时用骨疏康颗粒剂、盖天力片作为阳性对照,补脾中药作为相互对照。给药12周后,经无菌取材及实验指标检测:用RT-PCR法、Western blotting法检测股骨、肾、下丘脑组织OPG/RANKL的mRNA及蛋白表达。结果:1.RT-PCR法检测:股骨、肾、下丘脑存在OPG/RANKL的基因表达:测股骨上1/30PG/RANKL,与正常组比较,假手术组OPG指标无显著性差异(P＞0.05),模型空白组股骨OPG基因表达显著下降(P＜0.01),用药12周后,与模空组比较,补肾中药低剂量、高剂量组、补脾组、骨疏康组均可不同程度上调股骨OPG基因表达(P＜0.01),其中盖天力组(P＞0.05),无统计学意义;与正常组比较,假手术组RANKL指标无显著性差异(P＞0.05)模型空白组股骨RANKL基因表达显著下降(P＜0.01),用药12周后,与模空组比较,补肾中药低剂量、高剂量组、补脾组、盖天力组、骨疏康组均可不同程度上调股骨OPG基因表达(P＜0.01)。测肾OPG/RANKL,与正常组比较,假手术组OPG指标无明显差异(P＞0.05),模型空白组肾OPG基因表达显著下降(P＜0.01),用药12周后,与模空组比较,补肾中药低剂量、高剂量组、补脾组可上调OPG基因表达(P＜0.01),盖天力组、骨疏康组统计结果为(P＞0.05),无统计学意义;与正常组比较,假手术组RANKL指标无显著性差异(P＞0.05),模型空白组肾RANKL基因表达显著下降(P＜0.01),用药12周后,与模空组比较,补肾中药低剂量、高剂量组、补脾组、盖天力组、骨疏康组均可不同程度上调肾RANKL基因表达(P＜0.01),有显著性差异。测下丘脑OPG/RANKL,与正常组比较,假手术组OPG指标无显著性差异(P＞0.05),模型空白组下丘脑OPG基因表达显著上升(P＜0.01),用药12周后,与模空组比较,补肾中药低剂量、高剂量组、补脾组、盖天力组、骨疏康组均可不同程度下调下丘脑OPG基因表达(P＜0.01);与正常组比较,假手术组RANKL指标无显著性差异(P＞0.05),模型空白组下丘脑RANKL基因表达显著上升(P＜0.01),用药12周后,与模空组比较,补肾中药低剂量、高剂量组、补脾组、盖天力组、骨疏康组均可不同程度下调RANKL基因表达(P＜0.01)。2.Western blotting法检测:股骨、肾、下丘脑存在OPG/RANKL蛋白表达;测股骨上1/30PG/RANKL,与正常组比较,假手术组OPG指标无显著性差异(P＞0.05),模型空白组股骨OPG蛋白表达显著下降(P＜0.01),用药12周后,与模空组比较,补肾中药高剂量组、盖天力组、骨疏康组可上调股骨OPG蛋白表达(P＜0.01),其中低剂量组、补脾组(P＞0.05),无统计学意义;与正常组比较,假手术组RANKL指标无显著性差异(P＞0.05)模型空白组RANKL蛋白表达显著下降(P＜0.01),用药12周后,与模空组比较,补肾中药低剂量、高剂量组、补脾组、盖天力组、骨疏康组均可不同程度上调RANKL蛋白表达(P＜0.01),差异显著。测肾OPG/RANKL,与正常组比较,假手术组OPG指标无显著性差异(P＞0.05),模型空白组肾OPG蛋白表达显著下降(P＜0.01),用药12周后,与模空组比较,补肾中药低剂量、高剂量组、盖天力组可上调肾OPG蛋白表达(P＜0.01),骨疏康组也可上调OPG蛋白表达(P＜0.05),补脾组(P＞0.05);与正常组比较,假手术组RANKL指标无显著性差异(P＞0.05),模型空白组RANKL蛋白表达显著下降(P＜0.01),用药12周后,与模空组比较,补肾中药低剂量、高剂量组、盖天力组、骨疏康组均可不同程度上调肾RANKL蛋白表达(P＜0.01),差异显著,补脾组(P＞0.05)。测下丘脑OPG/RANKL,与正常组比较,假手术组OPG指标无显著性差异(P＞0.05),模型空白组下丘脑OPG蛋白表达显著上升(P＜0.01),用药12周后,与模空组比较,补肾中药低剂量、高剂量组、补脾组、盖天力组、骨疏康组均可不同程度下调下丘脑OPG基因表达(P＜0.01);与正常组比较,假手术组RANKL指标无显著性差异(P＞0.05),模型空白组下丘脑RANKL基因表达显著上升(P＜0.01),用药12周后,与模空组比较,补肾中药低剂量、高剂量组、补脾组、盖天力组、骨疏康组均可不同程度下调RANKL基因表达(P＜0.01)。结论:1.正常大鼠骨、肾、下丘脑组织可以在基因及蛋白水平表达OPG/RANKL,表明正常鼠骨、肾、下丘脑组织中存在OPG/RANKL,其在调节骨代谢过程中,发挥着重要的调控作用。2.骨、肾组织OPG/RANKL的基因、蛋白表达水平下降和下丘脑组织OPG/RANKL基因、蛋白表达水平升高,可能是肾虚骨质疏松症发生的重要机理之一。3.补肾壮骨方药可以上调骨、肾组织OPG/RANKL的基因与蛋白表达,下调下丘脑组织中OPG/RANKL的基因与蛋白表达,起到防治肾虚骨质疏松症的作用。