【摘 要】
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近年来,真菌感染日益增多,引起人们广泛重视.由于真菌感染缺乏典型临床症状,目前常规的形态学和培养方法以及血清学诊断方法较难满足临床需要,故寻找快速、敏感、特异的诊断
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近年来,真菌感染日益增多,引起人们广泛重视.由于真菌感染缺乏典型临床症状,目前常规的形态学和培养方法以及血清学诊断方法较难满足临床需要,故寻找快速、敏感、特异的诊断方法是一项亟待解决的研究课题.分子生物学实验技术的飞速发展使真菌的诊断取得了可喜的进展,尤其是聚合酶链反应(polymerase chain reation,PCR)技术的开发和应用为真菌检测提供了广阔的前景.该研究以NS<,5>-NS<,6>为引物,以保守的多拷贝真菌同源性序列ssu-rDNA的片段为目的扩增基因,建立了广范围真菌检测的方法.用此方法扩增医学主要致病真菌、细菌和人体细胞,结果所有真菌均扩增出一个约310bp的产物,与文献报道相同.而细菌和人体细胞均扩增阴性,重复试验结果相同.说明此PCR方法具有真菌特异性.将白色假丝酵母菌DNA 10倍稀释成一系列浓度过1μg-10μg,进行灵敏度试验,当样品中含有1pgDNA时,用该方法即可检出.真菌致密而坚韧,裂解比其他生物细胞更困难.研究人员比较了几种DNA提取方法,认为采用冷冻研磨法破壁更彻底,对酵母菌和丝状菌均有效.该方法简便易行,值得提倡.总之,有PCR方法扩增真菌同源性ssu-rDNA具有高度的特异性和敏感性,在24小时内可完成检测,为临床检测争取了时间,其有可能成为临床真菌感染诊断的一种实用、理想的方法.
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