【背景】肝细胞肝癌（肝癌）是肝脏中首要的恶性肿瘤。在全球恶性肿瘤死亡率排行榜中，肝癌排名第三。在很多国家，肝癌的发病率和死亡率仍在不断升高。由于早期诊断困难，缺乏有效的治疗措施，肝癌患者总体预后很差。近年来，一些重要的信号通路在肝癌发生发展中的作用得以阐明，多蛋白激酶抑制剂—索拉菲尼也已经被批准用于肝癌的治疗。然而，肝癌早期诊断难，晚期治疗效果差的现状仍然没有被改变。因此，深入理解肝癌发生发展的分子机制，寻找新的诊治靶点迫在眉睫。microRNA是一类长度为17～25个核苷酸的单链非编码RNA。大量研究表明，microRNA参与了肿瘤发生发展的调控。我们对肝癌相关microRNA的文献进行检索和分析，发现有两个研究小组都采用microRNA芯片比较肝癌组织和癌旁组织中microRNA表达差异。这两个研究小组的结果都表明，miR-125a在肝癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织。然而miR-125a在肝癌发生发展中的作用和机制却未见报道。【目的】1.验证miR-125a在肝癌和癌旁组织中的差异表达，并探讨miR-125a表达水平与患者临床病理资料的相关性；2.明确miR-125a对肝癌的恶性表型的调控作用；3.阐明miR-125a抑制肝癌细胞增殖和转移的机制。【方法】1.采用实时荧光定量PCR检测miR-125a在80例肝癌及癌旁组织的表达情况，并分析其表达水平和患者临床指标及预后的关系；2.构建miR-125a的慢病毒载体，感染细胞，建立稳定表达miR-125a和对照microRNA的肝癌细胞系。通过MTT实验，软琼脂克隆形成实验以及裸鼠皮下成瘤实验，检测miR-125a对肝癌细胞增殖的影响；3.通过Transwell侵袭实验以及裸鼠尾静脉注射实验，检测miR-125a对肝癌细胞迁移转移的影响；4.运用MTT和Transwell实验，采用miR-125a的抑制剂，检测下调内源性miR-125a对肝癌细胞增殖及侵袭的影响；5.采用target gene以及microrna文库等生物信息网站预测miR-125a可能作用的靶基因，并采用双荧光报告基因实验，实时荧光定量PCR实验以及免疫印迹实验，进一步的验证其靶基因；6.采用免疫组化实验进一步研究靶基因和miR-125a在肝癌及癌旁组织中表达情况，并分析两者的关系。【结果】1.对80例肝癌及配对癌旁组织标本的检测结果表明，和癌旁相比，miR-125a在62例肝癌组织中低表达，占总体样本的77.5%，癌旁组织和癌组织的平均表达差异为4.72倍。通过对临床资料的分析，我们发现miR-125a在肝癌中的表达差异与肝癌患者较差的预后和发生转移有关。2.通过感染带有miR-125a和对照microRNA的慢病毒，构建成功能稳定提高miR-125a表达的细胞系，MTT结果显示：过表达miR-125a肝癌细胞的生长能力在第四天开始受到抑制。其增殖能力明显低于对照microRNA及亲本细胞。软琼脂克隆形成实验表明，与对照和亲本细胞相比，过表达miR-125a的肝癌细胞得到更少和更小的克隆。通过裸鼠皮下成瘤实验发现，过表达miR-125a细胞组形成的肿瘤更小。3.过表达miR125a能显著抑制肝癌细胞体外的侵袭和转移能力。和体外实验相一致，动物实验结果表明，注射表达对照micoRNA的肝癌细胞到裸鼠体内形成了显著的肝肺转移灶，而注射miR-125a过表达肝癌细胞的小鼠则只有较少的转移灶形成。4．通过MTT和Transwell实验，我们发现通过下调miR-125a会显著提高肝癌细胞的增殖和转移能力。5.通过双荧光素酶基因报告系统，我们发现miR-125a可以显著降低含有MMP11和VEGF3‘UTR的报告基因载体的荧光素酶的活性。提示MMP11及VEGF可能为miR-125a的靶基因。qRT-PCR结果表明miR-125a可以显著下调VEGF和MMP11的mRNA水平。western blot在细胞蛋白水平证实了这一结果。6.为了进一步研究miR-125a和MMP11，VEGF在肝癌患者组织中的表达情况，我们采用了免疫组化的方法检测了MMP11和VEGF在此前用到的80对肝癌患者组织中的表达情况。通过spearman统计学分析，发现miR-125a的表达和MMP11，VEGF的表达呈负相关。【结论】1. miR-125a在肝癌组织中的表达明显低于配对的癌旁组织， miR-125a与肝癌的恶性表型显著相关；2.过表达miR-125a能显著抑制肝癌细胞体内外的增殖和转移能力；3.降低内源性miR-125a的表达会促进肝癌细胞的增殖和转移；4. miR-125a主要通过靶向抑制MMP11和VEGF的表达水平来抑制肝癌细胞的恶性表型；5.miR-125a与MMP11和VEGF在肝癌患者中的表达呈负相关，并影响患者的预后。