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研究目的:探索异常表达的PIWI基因在人类恶性肿瘤发生发展过程中起着的重要作用,本课题研究PIWI的人类同源基因HIWI在乳腺癌患者中的表达水平,及HIWI基因促进乳腺癌细胞群增殖机制及抑制乳腺癌细胞群细胞凋亡机制,探索HIWI是否能够作为未来临床上评价乳腺癌患者治疗及预后的潜在生化标志物。方法:通过实时聚合酶链式反应分别检测以下各组织:25例为癌旁正常乳腺组织;19例为Ⅰ-Ⅱ期,无腋窝淋巴结等转移的乳腺癌组织;8例为Ⅲ-Ⅳ期,且腋窝淋巴结等已经转移的乳腺癌组织,并用Western blotting检测各组组织蛋白表达水平。对MCF-7乳腺癌细胞株进行培养,获得其后代细胞群。构建HIWI基因过表达和敲除载体,分别为HIWI-pc DNA3.1和HIWI-sh RNA,将其与HIWI基因结合,然后使用LipofectamineTM 2000试剂将构建成功的载体对后代乳腺癌细胞株进行转染,并分为五个组(1、对照组;2、HIWI干扰组;3、HIWI过表达组;4、HIWI干扰救援组;5、HIWI过表达救援组)。通过PCR和Western blot测算HIWI m RNA与蛋白表达量,同时以细胞流式分析测算细胞凋亡率。最后测试CDK4、CDK6、CDK8、TβRⅠ与TβRⅡ的表达水平同HIWI表达的相关性。结果:PCR与Western blot检测结果显示乳腺癌组织中MAEL、HIWI与HILI相对m RNA表达量明显增高,而PIWIL3与HIWI2无明显改变。转染后的细胞株检测结果显示过表达组呈现HIWI m RNA的最高表达,干扰组呈现HIWI m RNA的最低表达,而对照组、过表达救援组和干扰救援组则呈现出相对平均水平,且过表达组与干扰组表达水平与其余三组相比,其差异有统计学意义(P<0.05)。HIWI在蛋白质表达方面,过表达组和其他组相比探测到最强信号而干扰组则探测到最弱信号。在Cyclin D和CDK基因的m RNA及蛋白表达方面,HIWI过表达组中CDK4、CDK6和CDK8基因的表达水平较其余四组都有明显增高,且与这几组间的差异有统计学意义(P<0.05),但其余各组间却无显著差异,因此HIWI表达量与TβRⅠ、TβRⅡ、CDK4、CDK6和CDK8的表达相关(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示HIWI过表达组有最低的细胞凋亡率,而干扰组却有最高的凋亡率,且这两组与其他三组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。另外,干扰组还表现出了明显较高的细胞G2/M期阻滞率。患者肿瘤特定生存率与HIWI的较高表达呈明显负相关(P<0.05)。结论:1.乳腺癌组织中HIWI与HILI的表达明显增高,且与肿瘤分期密切相关。2.高表达的HIWI能导致乳腺癌患者较差的预后,而HILI则欠缺这样的相关性。HIWI是更为合适的评价乳腺癌疾病进展与预后的潜在生化标志物。3.过表达的HIWI能够提升细胞活性并抑制细胞凋亡,干扰HIWI的表达则细胞凋亡率明显升高。4.HIWI的表达与TβRⅠ和TβRⅡ表达水平有负相关性,而与CDK4、CDK6和CDK8基因在内的细胞周期调控因子表达水平呈正相关,从微观层面可以调控乳腺癌的进展。