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合欢皮(Cortex Albizziae)为豆科植物合欢Albizzia julibrissin Durazz.的干燥茎皮。其味甘,性平。有安神、活血、消痈的功能。在传统医学中用于失眠、肺脓疡、痈肿、折伤疼痛等疾病的治疗。现代药理学研究表明,皂苷为合欢皮的主要有效成分,具有广泛的生理活性和药理作用。本课题从中药合欢皮中分离提取总皂苷,并以大孔吸附树脂进行进一步分离,检测了合欢皮总皂苷AJS及其5个流份的溶血性,研究了总皂苷AJS及其流份对卵清蛋白(OVA)和禽流感鸡痘病毒载体活疫苗(rFPV-HA)的佐剂活性,评价了它们的佐剂作用和特点,确定AJS佐剂活性的主要有效部位,为合欢皮皂苷作为免疫佐剂开发研究提供了科学依据。1.合欢皮总皂苷及其5个流份的溶血性采用比色法测定AJS及其5个流份(FW、FE30、FE50、FE75和FE95)对0.5%兔红细胞的溶血性。根据引起红细胞50%溶血浓度(HD50值),合欢皮总皂苷及其5个流份的HD50均显著大于Quil A (P＜0.001)。5个流份中以FE75的溶血性最强,其HD50为7.87±0.30μg·mL-1;其次FE95,其HD50为29.80±2.53μg·mL-1;FE50的HD50为195.81±6.18μg·mL-1;FW和FE30浓度达1000μg·mL-1时,对0.5%兔红细胞仍未呈现溶血作用。2.合欢皮总皂苷及其流份对OVA的佐剂活性研究以铝胶(Alum)和Quil A为佐剂对照,合欢皮总皂苷AJS和5个流份(FW、FE30、FE50、FE75和FE95)联合OVA免疫小鼠,采用MTT法和ELISA方法检测了对OVA免疫小鼠血清中特异性IgG总抗体及其亚类效价、刺激原和OVA诱导的脾细胞增殖反应以及自然杀伤(NK)细胞活性的影响,评价其活性活性。结果表明：AJS、FE50和FE75不仅能显著提高OVA免疫小鼠血清中特异性IgG、IgG1、IgG2a和IgG2b抗体效价,而且显著增强Con A、LPS和OVA诱导的免疫小鼠脾细胞增殖反应,促进NK细胞对Yac-1的杀伤活性,表明AJS、FE50和FE75对OVA免疫小鼠体液免疫和细胞免疫应答具有显著的佐剂活性。3.合欢皮总皂苷及其流份对禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗的佐剂作用研究合欢皮总皂苷AJS和4个流份(FE30、FE50、FE75和FE95)联合rFPV-HA皮下免疫小鼠,采用MTT法和ELISA方法检测了免疫小鼠血清中H5抗原特异性IgG、IgG1、IgG2a和IgG2b抗体效价,以及Con A、LPS和H5抗原诱导的脾细胞增殖反应,研究对rFPV-HA的免疫活性作用。AJS、FE50和FE75不仅能显著提高rFPV-HA免疫小鼠血清中H5抗原特异性IgG、IgG1、IgG2a和IgG2b抗体效价,而且能显著促进Con A、LPS和特异性抗原诱导的免疫小鼠脾淋巴细胞增殖反应。证实了AJS、FE50和FE75对rFPV-HA的显著佐剂作用。本研究不仅发现、证实了合欢皮皂苷的免疫佐剂活性,阐明了其佐剂作用的特点,并确定了总皂苷免疫佐剂活性的主要有效部位,为合欢皮皂苷作为免疫佐剂的开发研究奠定了基础。