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背景和目的:在全球范围内缺血性卒中是重要的致死致残性疾病。炎症反应参与卒中的整个病理生理过程。T淋巴细胞和小胶质细胞之间的相互作用在缺血再灌注损伤中起着重要的作用。早期再灌注策略仍然是治疗的首选,但会启动并扩大炎症反应导致继发性脑损伤。目前我们对卒中后炎症反应的理解非常有限。已经证实FasL突变的gld小鼠能够减轻缺血性卒中后的脑损伤;同时,双阴性T细胞(double negative T cells,DN T)在外周血和脾脏大量积累。然而DN T淋巴细胞的生物学行为没有明确。本研究旨在探讨DNT淋巴细胞在缺血性卒中中的影响。方法:流式细胞技术检测缺血性卒中后外周血和脾脏中的T淋巴细胞亚群,主要包括CD4 + T淋巴细胞、CD8 + T淋巴细胞、DNT淋巴细胞、Thl7及Treg细胞。同时,流式细胞术和q-PCR均能检测到缺血性卒中后浸润到梗塞半球的T淋巴细胞和活化的小胶质细胞。在体外,利用免疫磁珠技术分离C57BL/6或gld小鼠脾脏不同亚群T淋巴细胞与原代小胶质细胞共培养。随后利用流式细胞术和q-PCR测量小胶质细胞的表型的变化。利用CBA技术量化细胞因子和趋化因子的水平。Annexin-V和PI共染检测氧糖剥夺(OGD)后用上述共培养之后的条件性培基处理的神经元凋亡。结果:1)流式细胞术结果显示gld小鼠DN T淋巴细胞在外周血和脾脏中均大量积累。而gld小鼠发生缺血性卒中后,外周血中DNT淋巴细胞明显减少,脾脏DNT细胞则无明显改变,同时外周血中调节性Treg细胞在缺血性卒中后显著增加。2)在体内,通过流式细胞术发现,在B6和gld小鼠中MCAO 1天后T淋巴细胞即可浸润到缺血半球。在MCAO后3天gld小鼠的DN T淋巴细胞在缺血半球显著积累。同时MCAO后,gld小鼠缺血半球内Foxp3的表达上调而RoRc的表达下调。3)流式细胞技术及q-PCR结果均显示M1和M2的分子标志物如CD86和CD206在MCAO后72小时内均有上升。然而gld小鼠在MCAO后,更倾向于促进M2型小胶质细胞分化。4)在体外,B6来源的原代小胶质细胞与gld来源的不同亚群的脾T淋巴细胞共培养,原代小胶质细胞更倾向于替代活化型小胶质细胞即M2型小胶质细胞;而与B6来源的脾T淋巴细胞共培养后,小胶质细胞则表现为经典活化的小胶质细胞即M1型小胶质细胞。5)不同亚群的T淋巴细胞与小胶质细胞共培养,其中gld小鼠来源的DN T细胞上调一些抗炎细胞因子,IL-4和IL-10,并能减少OGD后神经元细胞的凋亡。结论:Gld小鼠中DN T淋巴细胞通过FasL调节小胶质细胞极化,在缺血性卒中发挥的神经保护作用。