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藜芦(Veratrum Linn.)是百合科(Liliaceae)植物,世界上大约有40多种,分布于亚、欧、北美洲。藜芦有多种药用功效,近年来发现藜芦属植物中含有的环巴胺对多种肿瘤都有良好的抑制作用,因此,环巴胺作为一种新型的抗癌药物在全球引起了高度重视。我国盛产藜芦,但是对于藜芦中环巴胺的提取分离工艺研究极少,阻碍了我国对新型抗癌药物的研究。本文主要研究了环巴胺的提取纯化及其制备,首先找出了合适的提取生物质,找出了合适的环巴胺检测条件,再对环巴胺的提取进行单因素实验、响应面实验的提取优化,然后进行单因素和正交实验对提取得到的环巴胺粗品进行柱层析分离纯化的工艺进一步优化,得到纯品环巴胺的同时得到环巴胺的制备原料介芬胺。最后,利用经典的黄鸣龙反应由介芬胺合成制备环巴胺。本研究创新在于高效利用了藜芦原料,提取分离的工艺优化与制备相结合,提高了环巴胺的产率,主要研究内容及得到的相关结论如下:(1)探索得到了较好的环巴胺检测条件:WATO-54275C18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:0.01%三氟乙酸(A)和乙腈(B);分析时长:25min;流速:1.0mlL/min;检测波长:215nm;柱温:25℃;梯度洗脱:0-12min:90%-70%(A);12-18min:70%-70%(A);18-23min:70%-35%(A);23-30min:35%-35%(A)。(2)在四种常用药用藜芦中找到了合适的环巴胺提取生物质:发现在毛叶藜芦中含有丰富的环巴胺,通过高效液相色谱检测环巴胺标准品绘制环巴胺标准曲线,并得到毛叶藜芦中环巴胺的含量约为0.076%。(3)采用响应面法优化了从毛叶藜芦中提取环巴胺的条件:在单因素实验的基础上选取提取液料比,提取时间和提取温度为随机因子,探究对环巴胺的提取的影响,各因素对环巴胺提取率的影响程度大小依次为:提取液料比A(p<0.0001,极显著)>提取时间B(p=0.0009,极显著)>提取温度(p=0.0035,极显著)。并确定了最佳的提取工艺参数为:提取液料比9:1(mL/g),提取时间10.0h,提取温度48.0℃。(4)在单因素实验的基础上设计正交实验,优化了环巴胺柱层析纯化条件:以洗脱剂的比例、上样量、流速以及上柱硅胶量为随机因子,进行正交实验,得出因为当洗脱剂己烷:丙酮=65:35,上柱硅胶量为80g,上样量为12g,流速控制在6mL/min下进行洗脱时,得到的环巴胺的纯度最高同时收率也是最高,分别为94.4%和74.2%。再对纯度较高的环巴胺重结晶继续纯化,得到97.2%的高纯品环巴胺。(5)通过柱层析分离纯化得到了介芬胺的纯品:在柱层析分离纯化过程中,收集分离组份,通过质谱与核磁确定了介芬胺,并得到了介芬胺纯品。(6)在单因素实验的基础上设计正交实验,得到了介芬胺制备环巴胺的优化条件:以反应时间、反应温度、原料摩尔比、催化剂的量为随机因子进行正交实验。考察对介芬胺制备环巴胺收率的影响。得出在使用二乙二醇为反应溶剂、聚乙二醇400为反应催化剂、反应温度为200℃、反应时间为2h、反应原料摩尔比n(水合肼):n(介芬胺)=2.5:1,催化剂的量占体积百分比为3%时,得到的环巴胺收率最高,可达到80.8%,经柱层析法和重结晶纯化后,可以获得纯度高达98.3%的环巴胺。