新疆药桑叶多糖的提取、分离、纯化及活性研究

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药桑(Morus nigra L.)在植物分类学上属桑科桑属黑桑种。分布新疆南疆地区,一直作为维吾尔族的民间药材用于消炎、补血等药用功效。现代研究发现药桑叶中含有丰富的生物碱、黄酮类、多糖、蛋白质等物质。其中多糖类物质具有明显的降血糖、免疫调节等功效。本文以药桑叶为主要原料,采用正交试验法对多糖提取工艺进行了优化、采用HPLC-ELSD法测定了分级醇沉中单糖的构成、采用AB-8大孔树脂对醇沉后的粗多糖进行了脱色、脱蛋白处理,采用DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱对粗多糖进行了分离,最后通过葡聚糖凝胶G-100进行了纯化。得到两种相对均一分子量的多糖组分(MPS-IV-1、MPS-IV-2)。并对醇沉多糖和均一多糖进行了体外清除DPPH自由基、清除ABTS自由基、还原力测定、α-葡萄糖苷酶的体外抑制作用、对Hela细胞抑制率等相关活性进行了研究,主要研究结果如下:1、对药桑叶多糖提取工艺进行了研究,最佳提取工艺为料液比1:30(g/mL),提取时间3h,温度90℃,得率为8.98%。在95%浓度乙醇条件下醇沉样品中多糖含量最高为37.8%。建立了HPLC—ELSD法分析药桑叶多糖中的单糖成分构成。多糖组分被三氟乙酸水解后,在色谱条件:流动相为乙腈/水(V:V=80∶20),等度洗脱,流速0.8 mL/min,柱温30℃,漂移管温度60℃,氮气作为载气,流速为3.0 L/min下。30 min内阿拉伯糖、木糖、果糖、鼠李糖、葡萄糖5种单糖均实现了完全分离,并在此条件下测定了分级醇沉下不同组分的单糖构成。清除DPPH自由基、清除ABTS自由基、还原力测定、α-葡萄糖苷酶的体外抑制、Hela细胞抑制率能力最佳组分依次为MPS-Ⅳ(80%醇沉条件)、MPS-Ⅲ(60%醇沉条件)、MPS-Ⅱ(40%醇沉条件)、MPS-Ⅰ(20%醇沉条件)、MPS-V(95%醇沉条件)。2、从80%乙醇浓度条件下醇沉的药桑叶粗多糖中分离得到MPS-IV-1、MPS-IV-2两个多糖组分。凝胶色谱(GPC)-多角度激光光散射(MALLS)联用测定分子量分别为12.16 KDa、5.43 KDa。MPS-IV-1是有鼠李糖、阿拉伯糖、果糖、葡萄糖、半乳糖。MPS-IV-2是有阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖构成。运用红外光谱等技术对MPS-IV-1、MPS-IV-2进行初步结构表征。MPS-IV-1、MPS-IV-2对α-葡萄糖苷酶在表现出一定抑制活性。
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