β-内酰胺类抗生素是目前治疗感染类疾病最为重要的药物之一,为人类的健康生活提供了重要的医疗保障。但是,随着这类抗生素的大量应用,临床上出现了越来越多的耐药菌,导致抗生素的药效大大降低,甚至出现了几乎能够抵抗所有抗生素的"超级细菌"。病菌产生耐药性的一个主要原因是细菌产生了一种能够水解破坏β-内酿胺类抗生素的酶,即β-内酰胺酶。现有研究表明,β-内酰胺类抗生素与相应的β-内酰胺酶抑制剂联合使用能够很大程度地恢复抗生素的抑菌效力。然而,对于金属主导的一类β-内酰胺酶目前还没有能够在临床中应用的β-内酰胺酶抑制剂,因此对于β-内酰胺酶抑制剂的研究仍然是当前非常重要的一个任务。目前β-内酰胺酶抑制剂的筛选主要是利用底物水解前后紫外吸收的差异,该方法所需底物量较大,紫外吸收波长短,易受到外界的干扰。在本论文中,我们通过对β-内酰胺酶基因的载体进行筛选和蛋白表达条件进行优化,最终完成了 8个不同类型的β-内酰胺酶的表达纯化,并应用部分β-内酰胺酶对荧光探针的水解进行了系统研究,通过相关条件优化完成了 β-内酰胺酶抑制剂快速筛选平台的构建。本论文建立基于β-内酰胺酶荧光探针的β-内酰胺酶抑制剂快速筛选平台,该平台利用荧光探针水解前后荧光强度的变化检测酶的水解活性,具有检测灵敏度高,酶的使用量少等优点,尤其适用于对潜在活性化合物的高通量筛选。