脑缺血是常见的中枢神经系统疾病,具有高致残率、高致死率、高复发率的特点。在老龄化严重的现代社会,脑缺血给社会和家庭造成了很大的经济负担,因此,寻找新的脑缺血给药策略意义重大。NMDA受体是重要的抗脑缺血靶点,而GluN2A是NMDA受体的主要亚基之一,本课题聚焦于GluN2A亚基,通过使用GluN2A拮抗剂TCN-201和能够上调GluN2A亚基表达的姜黄素,初步探讨“在脑缺血恢复期,通过增强GluN2A亚基功能来治疗脑缺血”的可行性。首先,通过摸索海马神经元的体外长期培养的条件,建立了一种长期培养高纯度海马神经元的方法,并采用蛋白免疫印迹方法检测了GluN2A亚基在海马神经元中的表达规律;其次,通过摸索NMDA损伤浓度和损伤时间,成功建立了NMDA兴奋性毒性模型;最后,制备了姜黄素-羟丙基-β-环糊精包合物,并对此包合物进行了质量评价,在此基础上,采用延迟给药方案,考察了TCN-201和姜黄素包合物对NMDA诱导的海马神经元损伤的作用。结果表明,采用本课题的培养条件可得到较高纯度的海马神经元培养物,GluN2A与培养时间呈趋势增加,培养至第11天时可达到一个较高的表达水平;适宜的NMDA兴奋性毒性模型造模条件为NMDA浓度50μM,孵育时间为20 min,此时可达到中等损伤程度;姜黄素-羟丙基-β-环糊精包合物的制备条件为姜黄素与羟丙基-β-环糊精的摩尔比为1:1时,反应温度为50℃,搅拌速度为600 rpm,反应时间为4 h;NMDA撤除后给予TCN-201可加重NMDA兴奋性毒性损伤,而给予姜黄素包合物则可显著抑制NMDA的兴奋性毒性损伤。由上述结果表明,在脑缺血恢复期,GluN2A亚基可能介导促存活作用。因此,“在脑缺血恢复期,增强GluN2A亚基功能”可能会成为一种较为有效的抗脑缺血的给药策略,值得进一步研究。