农杆菌介导的大麦黄矮病CP基因转化小麦的研究

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本试验利用农杆菌介导的转化法对大麦黄矮病毒外壳蛋白CP基因在小麦上进行了转化,构建了两种植物表达载体,转入5种农杆菌菌株,采用5种转化受体,部分处理中获得抗性植株,分子检测证明,部分植株中外源基因已整合到小麦基因组,主要内容如下:1.对小麦成熟胚进行了培养,获得较好的愈伤组织状态,并获得再生植株。研究表明,提高肌醇浓度,有利于愈伤组织的分化,而添加ABA只对某些品种的分化有利。同时,对小麦幼胚、茎尖和花药的组织培养进行了试验。2.构建了两种植物表达载体并转入农杆菌的几个菌株pPPI118:35S启动子-CP-NOS-NPTII pPPI119:35S启动子+增强子-CP-NOS-NPTII将pPPI118转入LBA4404(pAL4404),C58和AGL1中;将pPPI119转入LBA4404(pAL4404),LBA4404(pSB1)和EHA105中。3.对幼胚进行转化,共获得13个株系19个G418抗性植株,其中有3个株系4个植株表现为PCR阳性,最高转化频率为1.3%。4.对幼胚愈伤组织进行了转化,共获得11个株系14个G418抗性植株,其中有8个株系11个植株为PCR阳性,最高转化频率为2.5%。5.对茎尖进行了转化,只获得抗性植株,但未检测到PCR阳性植株。6.对花药愈伤组织进行了转化,只获得抗性愈伤组织,未能分化出植株。7.将抗性植株栽于温室,部分植株成活,并已经结实。8.Southern杂交证明外源基因已整合到小麦基因组。
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