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溶藻弧菌作为我国南方海水养殖的重大病害之一,给养殖业造成了巨大的损失。本课题着眼于致病机理的研究。细菌铁摄取系统作为一种致病的毒力因子,在某些人畜病原中得到证实。但溶藻弧菌的摄铁机制是否与其致病性密切相关,这还是一个未知数。
研究中,首先用分子手段,通过16SrRNA、标签基因hsp60、RAPD和质粒酶切图谱等方法对溶藻弧菌进行了鉴定,对不同来源的溶藻弧菌进行区分,证明这些方法可以用于实际养殖中对致病菌株的确认。然后,研究了溶藻弧菌在铁限制环境中对铁抑制抗性、生长状况、铁载体的产生以及铁诱导外膜蛋白的表达。溶藻弧菌可以在高铁螯和剂的环境中生存,并有铁载体表达。限铁环境对溶藻弧菌的生长有抑制作用,但这种抑制作用可以被补加的铁营养消除。溶藻弧菌产铁载体的能力有区别,分离于发病鱼体的溶藻弧菌产铁载体能力超过环境中分离的溶藻弧菌。在限铁环境培养时,溶藻弧菌能够特异性表达约66kDa的外膜蛋白。最后克隆了溶藻弧菌铁摄取调控基因——fur基因(GenBank登录号:AY957395),鉴定了溶藻弧菌fur基因的功能,发现溶藻弧菌的fur基因可以互补大肠杆菌那fur缺陷株H1780。用锰抗性的筛选方法,筛选到溶藻弧菌的fur突变株。构建表达载体pET-fur在EcoliBL21(DE3)外源表达了溶藻弧菌Fur蛋白。通过研究,对溶藻弧菌铁摄取和调控机制有了初步的认识。