研究背景:现如今卵巢癌的发病率不断增长,且其预后差、死亡率极高,5年生存率仅有20%[1]。卵巢癌早期很少有明显的症状体征,早期筛查方法匮乏,因而诊断率很低。多数患者在首次就诊时就属晚期,无法行彻底的手术治疗。所以随着人类对卵巢癌治疗方法的不断探究,卵巢癌的化疗成为了其中不可或缺的一部分。随着铂类药物的应用,肿瘤的化学治疗进入了新的时代。铂类物质与传统药物的抗肿瘤机制大相径庭,其造成的DNA复制障碍直接抑制了癌细胞的分裂。虽然这种作用是非特异性的,但癌细胞的增殖更加活跃、修复功能不健全等特点使其对铂类的敏感性明显高于正常细胞[4]。大量的调查研究均显示铂类已成为我国化疗方案的重要组成部分,被广泛应用于卵巢癌、小细胞肺癌等恶性肿瘤的治疗中。卡铂作为第二代铂类家族的抗肿瘤药物[5],水溶性及稳定性都极大的优于顺铂,在疗效相同的情况下毒副作用明显减小,因此在一些肿瘤的临床治疗中逐步取代顺铂,成为重要的化疗药物。卡铂与其他药物不存在交叉耐药,所以可以作为联合用药的基础,成为治疗卵巢癌等多种恶性肿瘤的首选方案[6]。但随着铂类药物的普遍应用,其耐药性导致的疗效下降也不容忽视。西罗莫司是一种大环内脂类抗生素,不仅具有抗菌作用,而且可以起到免疫抑制剂的作用。在慢性肾病方面,西罗莫司亦可以减少蛋白尿的产生、减缓病程的发展[19]。在心血管领域,利用西罗莫司研发的药物涂层支架治疗冠状动脉再狭窄亦取得了显著的成效[20]。经过不断的探索科学家发现西罗莫司还具有抑制肿瘤细胞的作用。1984年Eng C P等人对西罗莫司抑制肿瘤细胞生长的作用进行了进一步实验,实验表明与氟尿嘧啶等其他抗肿瘤药物相比,西罗莫司不仅可以抑制任何生长阶段的肿瘤细胞,而且毒性最低。近年来西罗莫司在晚期肾癌等多种恶性肿瘤的治疗中逐步应用,相关实验还证明它可以对其他药物的抗肿瘤作用起到促进作用。因此我们可以推测,西罗莫司也可以作用于卵巢癌细胞,并且当其与卡铂联合应用时可增强卡铂对肿瘤细胞的作用效果。目的:监测西罗莫司(Sirolimus)、卡铂(CPB)分别和同时给药时卵巢癌Skov-3在细胞增殖、凋亡、细胞周期阻滞等方面的情况,进一步验证西罗莫司对卵巢癌细胞的抑制作用及其可提高卡铂化疗疗效的作用,从而为卵巢癌的治疗提供新的思路。方法:(1)通过细胞MTT实验检测西罗莫司、卡铂分别及同时应用对卵巢癌Skov-3细胞增殖的影响。(2)Annexin V/PI双染法检测西罗莫司、卡铂分别及同时应用对卵巢癌Skov-3细胞凋亡的影响。(3)流式细胞术PI染色法检测西罗莫司、卡铂分别及同时应用对卵巢癌Skov-3细胞周期分布的影响。(4)RT-PCR技术检测西罗莫司、卡铂分别和同时作用于卵巢癌Skov-3细胞时细胞中Bcl-2/Bax基因的表达情况。结果:(1)细胞MTT实验结果显示:单一使用西罗莫司、卡铂以及二者联合用药时,卵巢癌Skov-3细胞的增殖均被抑制,抑制率由大到小排序为:西罗莫司联合卡铂组、卡铂组、西罗莫司组,这种抑制作用与作用时间呈正相关,差异均具有统计学意义(P<0.05)。(2)Annexin V/PI双染法显示:单一及同时使用西罗莫司、卡铂时均可促进卵巢癌Skov-3细胞的凋亡,这种作用效果由强到弱依次为:西罗莫司卡铂联合用药组、卡铂组、西罗莫司组,作用效果与作用时间呈正相关性,差异均具有统计学意义(P<0.05)。(3)流式细胞术(FCM)PI染色法显示:单一及同时使用西罗莫司、卡铂时均可增加卵巢癌Skov-3细胞中G1期细胞的比例,且作用效果由强到弱依次为:西罗莫司卡铂联合用药组、卡铂组、西罗莫司组,作用效果与作用时间呈正相关性,差异均具有统计学意义(P<0.05)。(4)RT-PCR技术检测结果显示:单独及同时应用西罗莫司、卡铂时可增加卵巢癌Skov-3细胞中促进凋亡的Bax基因的表达,减少抑制凋亡的Bcl-2基因的表达,作用效果由强到弱依次为:西罗莫司卡铂联合用药组、卡铂组、西罗莫司组,作用效果与作用时间呈正相关,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:西罗莫司与卡铂均可抑制卵巢癌Skov-3细胞的增殖、诱导其凋亡,阻滞其细胞周期进展、降低凋亡基因Bcl-2/Bax的表达,且当二者联合应用时抗肿瘤效果最佳。