核转录因子RelB在前列腺癌中的作用及其机制的探讨

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目的本研究试图阐明NF-κB家族成员中的RelB在前列腺癌细胞中的作用以及探讨潜在的生物学机制。方法用Western blot法检测三种前列腺癌细胞株中NF-κB家族成员的蛋白表达情况。建立稳定转染RelB-siRNA的DU145细胞株。Western blot法检测RelB沉默后细胞的NF-κB家族其它成员的蛋白表达情况。用xCELLigence系统实时动态观察RelB沉默后细胞生长,以及细胞迁移和细胞侵袭的变化。用流式细胞术检测RelB沉默后细胞的细胞周期、细胞增殖以及细胞凋亡的变化。用qRT-PCR技术检测基因的mRNA水平的表达。用细胞划痕实验观察RelB沉默后细胞迁移能力的变化。用明胶酶谱MMP活性检测方法检测RelB沉默后细胞的MMP2、MMP9活性变化。结果RelA、p50、RelB和p52蛋白在雄激素非依赖型前列腺癌细胞株DU145和PC-3中呈持续性高表达,RelB在DU145细胞中的表达最为显著。在DU145细胞株中分别稳定转染pSilencer3.1-siRelB质粒和pSilencer3.1质粒,成功获得实验组RelB低表达DU145-siRelB细胞和对照组DU145-control细胞。RelB的沉默对细胞中NF-κB家族其它成员无明显影响。DU145-siRelB细胞的生长速度明显慢于DU145-control细胞,并且迁移、侵袭能力均较DU145-control细胞显著减弱。细胞划痕实验也表明了DU145-siRelB细胞的迁移能力明显较DU145-control细胞弱。DU145-siRelB细胞与DU145-control细胞在细胞增殖和细胞周期上无明显差异。DU145-siRelB细胞的凋亡细胞百分比比DU145-control细胞明显增多。DU145-siRelB细胞中的bcl-2基因mRNA表达水平较DU145-control细胞明显下调,其余相关基因Bcl-xl、ICAP1、Bax、A20、Bim、Mcl-1mRNA表达水平无明显变化。DU145-siRelB细胞中的ITGB1基因的mRNA和蛋白质水平的表达均较DU145-control细胞显著下调。DU145-siRelB细胞中的MMP2、MMP9蛋白质水平的表达均较DU145-control细胞显著下调,同时明胶酶谱MMP活性检测方法检测显示DU145-siRelB细胞MMP2和MMP9的表达显著低于DU145-control细胞。结论在雄激素非依赖型前列腺癌细胞株中,RelB在DU145细胞中表达最为显著。DU145-siRelB细胞的生长明显慢于DU145-control细胞,并且迁移、侵袭能力均较DU145-control细胞显著减弱。RelB的缺失显著抑制了前列腺癌细胞株DU145细胞的生长,与细胞凋亡增多相关,bcl-2基因的下调可能是潜在的原因之一。RelB缺失显著抑制了肿瘤细胞的迁移和侵袭能力,ITGB1基因表达的下调以及MMP2和MMP9活力的减弱是潜在的原因之一。
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