几丁质酶抑制剂的研究——酶抑制剂产生菌的筛选、发酵工艺优化放大及杀虫试验

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几丁质酶在许多真菌和昆虫的生理和发育上具有许多功能,以其为靶标的几丁质酶抑制剂可以作为抗真菌剂、生物杀虫剂和抗疟药。 论文首先筛选得到一株产几丁质酶菌株,并对其所产的几丁质酶酶学性质做了初步研究,考察了最适反应温度、最适pH及金属离子对酶活的影响。 通过建立的模型,从浙江东海的海水中筛选得到能分泌几丁质酶抑制剂的细菌,经鉴定属于Acinetobacter lwoffii ChI-06(洛菲不动杆菌);并考察了ChI-06的生长曲线及遗传稳定性。 比较系统地研究了ChI-06发酵工艺的优化,以提高其酶抑制剂的产率。经优化确定的较佳培养基为:蛋白胨10.0 g/L,酵母膏2.0 g/L,葡萄糖5.0 g/L,NaCl 5.0 g/L,Al(NO<,3>)<,3> 2 mmol/L,海水晶30 g/L;较佳培养条件为:培养基初始pH为7.0,摇瓶装量为50 mL培养基/250 mL三角瓶,接种量为6%,在28℃,180 r/min摇床培养6 d。按优化工艺进行发酵,酶抑制剂的活性达到65.42%,比优化前提高了86.91%。在3 L发酵罐的研究中,采用发酵前、后期改变搅拌转速,发酵周期比摇瓶缩短了一半多,酶抑制剂的活性达到81.73%,比摇瓶发酵结果提高了24.93%。 对该酶抑制剂理化性质的初步研究表明,它可能是一种(多)糖类酶抑制剂。以果蝇为昆虫模型,Allosamidin和抑太保作对照的杀虫实验表明,当酶抑制剂的添加量为0.75 mL时,在第三天对果蝇的杀虫率达到91.67%。
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