猴耳环来源于豆科猴耳环属植物猴耳环Archidendron clypearia (Jack) Nielsen的干燥叶,具有清热解毒、凉血消肿、止泻等功效,可有效治疗上呼吸道感染、急性扁桃体炎、急性咽喉痛等,亦可试用于细菌性痢疾。猴耳环用途广泛,除直接用药外,还开发了多种以猴耳环为主药的中成药,如猴耳环消炎片,猴耳环胶囊等。多年来,由于对资源的需求较大,而野生猴耳环因受环境变化的影响,已出现资源短缺现象。因此,许多学者已经对猴耳环进行了一系列的研究,并在许多地方进行大规模的人工栽培。猴耳环与同属植物由于外观和显微结构相似,加工后难以辨认,因此导致基源模糊,进而影响药材的质量。所以准确识别猴耳环物种的身份是非常重要的。目的：通过对野生猴耳环样品的4段候选序列(叶绿体基因psbA-trnH、rbcL、rpoCl;核基因ITS2序列)进行筛选,经过筛选后的序列联合Genbank数据库中所有已知的同源基因序列来进行多重序列比以及遗传关系分析,寻找特异的碱基位点。同时,从种内和种间两个方面探索DNA序列分析方法识别猴耳环产地是否可行。通过高效液相色谱法比较不同产地猴耳环有效成分含量差异,并结合DNA条形码,分析基因序列、化学成分含量、分布地三者关系,为猴耳环品种选育和驯化作为依据。方法：一、DNA测序与比对：将所有植物材料用无菌水冲洗干净,称取干净、无病虫害的新鲜植物叶片50mg或用硅胶干燥保存的植物叶片30mg,经液氮研磨后,用天根离心柱型植物基因组DNA提取试剂盒提取总基因组DNA。利用引物对上述样品进行PCR扩增。取PCR扩增产物在1%琼脂糖凝胶电泳上检测,并送测序公司进行双向测序。序列拼接和校对使用Codoncode Aligner3.7.1,用Bioedit7中的ClustalW进行多重序列比对,用MEGA5中的K2P模型计算遗传距离,构建系统发育树。采用SPSS19软件进行统计分析,优选4段候选序列用于识别猴耳环的分布地。二、HPLC检测：建立能同时测定猴耳环没食子酸和槲皮苷的色谱条件,测定猴耳环中两种有效成分的含量,得出各地区猴耳环有效成分的含量差异。三、基因序列结果与有效成分含量测定结果相关性分析：采用SPSS19软件进行基因型、化学型、生态型三者关系的统计学分析。初步探究三者内在关系。结果：一、DNA条形码：4种序列中,只有psbA-trnH和rbcL发现变异位点,变异位点数分别为28和6,并且,变异位点数集中于海南省的猴耳环。通过统计分析,psbA-trnH序列更适合用于快速鉴定海南省的猴耳环。二、含量测定：通过建立色谱条件,得出流动相为甲醇-0.4%磷酸-乙腈(30：66：4),流速为1.Oml/min,检测波长在270nm,柱温：室温,能有效、准确地同时测定没食子酸和槲皮苷。含量测定结果以海南省的猴耳环有效成分含量最高。三、根据psbA-trnH序列建立的基因型,通过聚类分析建立化学型,经统计软件SPSS19分析,得出海南省的样品以psbA-trnH序列建立的基因型与化学型存在对应关系,这提示海南省猴耳环很可能形成了自身独特生态型。结论：受海南省独特的环境因素的影响,并经过长期的基因进化的积累,在psbA-trnH序列中,很有可能形成自身独特的基因型或生态型。这提示,利用psbA-trnH序列对快速鉴定海南省的猴耳环有一定的可行性。同时,本研究中的样品有效成分含量差异受到内因和外因2个因素的影响,内因是基因因素,外因气候条件。这两种因素相互影响和作用,并经过长时间的遗传进化,才能形成独特的生态型。