Vero细胞化学污染物毒性表现特征及在生物毒性检测中的可行性分析

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近年来饮用水中化学污染物逐渐增多,对人体健康和生态环境造成的危害日益加重,因此饮用水及相关材料的安全评价具有重要意义。但目前为止,国内尚无较为完善的相关评价方法。细胞毒性试验,尤其是Vero细胞与人体高度同源,对各类化学物质的响应具有一定的普适性,并且培养方法简单。本文研究了有机物对Vero细胞形态的影响和对细胞增殖的抑制,通过比较这两种细胞毒性表现特征的灵敏度,分析了Vero细胞变形法在化学物质生物毒性检测中的可靠性,同时应用流式细胞仪探索了污染物作用下Vero细胞状态的变化及可能原因,最后尝试用该法来考察饮用水相关材料的生物安全性。两种典型有机化学物2,4,6-三氯苯酚(TCP)和邻苯二甲酸二辛酯(DOP)作用于Vero细胞后的形态观察结果表明:和对照相比,当TCP浓度为0.5mg·L-1时,已有少量细胞变圆。随着药物浓度的增加,变圆细胞的比例增大;而DOP浓度为0.5ppm时细胞轮廓开始加深,透明度下降,随着浓度进一步增加,形态变化愈发明显。用MTT比色法测定TCP和DOP对细胞增殖抑制的结果表明:TCP浓度大于1mg·L-1,DOP浓度大于1ppm时,均会对Vero细胞的增殖产生抑制作用;TCP和DOP浓度分别大于5mg·L-1和5ppm时,药物浓度和抑制率之间呈良好的正相关性。而TCP浓度小于1mg·L-1时对细胞增殖没有抑制作用,DOP在0.25ppm~2ppm之间抑制率随浓度呈不规律变化。以TCP为例,用流式细胞术分析在有机物作用下Vero细胞状态的变化,结果表明:(1)TCP对Vero细胞的毒性表现特征和TCP浓度有直接关系。当TCP浓度较低(小于1mg·L-1)时,细胞毒性主要表现为细胞形态的变化;当TCP浓度大于1mg·L-1时,细胞的增殖开始受到抑制;(2)TCP对Vero细胞的毒性表现特征和其暴露于TCP的时间也有重要关系。TCP作用24h后Vero细胞的毒性主要表现为对细胞膜完整性的影响,产生凋亡的细胞比例较小。而48h后,Vero细胞出现凋亡现象,并且随TCP浓度增加,凋亡和坏死细胞比例大量增加。细胞复壮实验进一步证实24h内TCP引起Vero细胞形态的变化不会导致细胞坏死或凋亡,细胞仍处于存活状态。结合细胞形态变化和流式细胞仪散点图,推测细胞形态变化和细胞膜损伤有关。由细胞膜损伤导致的细胞变形可能是一种较细胞增殖率、凋亡、坏死等指标更为敏感的化学物细胞毒性表征方法。最后,利用Vero细胞形变法对给水PVC管和一次性塑料杯进行细胞毒性评价,MTT法作为对照。实验结果表明:(1)给水PVC和一次性塑料杯的材料浸提液会引起Vero细胞形态的变化。当浸提液浓度一定时,随着浸提温度的升高,含两种材料浸提液的培养基中变形细胞的比例增加,说明温度升高会导致材料浸提液中毒性物质的增多或浓度增大。(2)当温度一定(37℃)时,随着浸提液体积比的增加,变形细胞的比例明显增加。细胞变形和浸提液浓度之间存在较好的相关性。(3)两种材料在各温度下的浸提液对Vero细胞增殖有一定的抑制作用,但抑制率和温度之间缺乏相关性。(4)PVC材料浸提液浓缩和稀释后细胞增值率无明显变化,而一次性塑料浸提液对细胞增殖的抑制率和体积比有良好的相关性。(5)从细胞变形和增殖受抑制的情况来看,一次性塑料浸提液对Vero细胞的影响高于给水PVC材料,这可能表明一次性塑料的生物毒性比PVC材料大。(6)Vero细胞形态法测定材料浸提液的生物毒性比MTT法灵敏,虽然还难以准确定量,但可以作为一种毒性初筛的手段。
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