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概述 骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)是存在于骨髓组织中的除造血干细胞外的含有干细胞的细胞混和体，具有高度自我更新能力和多向分化潜能，在特定条件下可分化多种细胞，在组织工程、细胞及基因治疗中有广阔的应用前景，越来越受到人们的重视。而当前心血管疾病已成为当今世界威胁人类健康的重大疾病之一，利用各种干细胞实现心肌和血管的再生已成为世界心血管病研究的热点之一，方兴未艾。在过去的5年里，BMSCs在心脏病治疗中的应用得到了越来越多的关注。基础研究中发现干细胞移植后细胞存活率较低，心肌直接注射细胞存活率一般仅为2％-5％。但是，就是这些移植入缺血心肌区的少量干细胞在临床上产生了一些非常可观的治疗效果，减少梗塞面积，阻止心室重塑，改善心功能，而确切的机制尚不清楚。 本实验从大鼠腿骨骨髓中分离出骨髓间充质干细胞，以无血清和缺氧处理模拟体内养分匮乏和低氧的缺血微环境，研究在此条件下移植BMSCs的旁分泌作用对心脏成纤维细胞的生物学性状的影响，并初步探究讨其机制，力图为临床干细胞的移植机制提供实验依据。 目的 体外模拟机体缺血缺氧环境，观察移植的骨髓间充质干细胞(BMSCs)旁分泌作用对心脏成纤维细胞生物学性状的影响，为BMSCs移植机制提供实验依据。 方法 1．分离培养SD大鼠的骨髓间充质干细胞和心脏成纤维细胞(CFs)。 2．用缺氧袋、缺氧罐和无血清培养液模拟体内的缺血缺氧环境，并收集BMSCs在此环境中的3、6、9、24小时的条件培养液，以此条件培养液作为刺激因子来研究BMSCs的旁分泌作用对心脏成纤维细胞生物学性状的影响。 3．以BMSCs条件培养液作用CFs 40小时，用MTT法测细胞相对数目观测细胞增殖能力，用~3H-TdR掺入实验检测CFBs的DNA合成的情况，用~3H-Pro掺入实验检测CFs的总胶原蛋白的合成情况。以RT-PCR法检测CFs Ⅰ犁和Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶(MMP-1)及其抑制剂(TIMP-1)mRNA表达。 4．BMSCs条件培养液作用CFs 40小时，Ⅲ型胶原前氨基端肽法检测CFs的