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目的1.ADHD患儿血清差异表达microRNA对FOXO1表达调控的作用。2.ADHD动物模型SHR大鼠PFC中过表达和干扰miR-144-3P后,观察SHR多动样症状的变化以及FOXO1和TH表达水平的改变。3.分析FOXO1在不同分化程度细胞中表达水平的差异,过表达和干扰miR-144-3P后观察细胞分化水平变化。方法1.收集40例未经治疗的ADHD患儿和120例相同条件的健康儿童血清样本,形成1比3配比配对,经过芯片筛选出血清中差异表达的全部microRNA。重新收集血清样本,RT-qPCR对差异表达microRNA进行验证。2.通过生物信息网站在有差异的microRNA中分析筛选出靶向调节FOXO1的microRNA。荧光素酶(Luciferas)活性实验验证该microRNA是否靶向结合FOXO1 3?UTR。3比较WKY和SHR大鼠PFC miR-144-3P和FOXO1表达水平差异。SHR大鼠PFC注射过表达慢病毒载体miR-144-3p-virus,通过旷场实验和迷宫实验观察SHR大鼠ADHD样行为变化;取PFC脑组织,分别在mRNA和蛋白水平检测FOXO1和TH的表达量。4.QPCR检测PC12H和PC12L细胞FOXO1 mRNA表达水平差异。PC12L细胞感染miR-144-3p-virus,观察对细胞分化影响。结果1.ADHD儿童血清中筛选统计出25种差异表达的microRNA,随后进一步筛选出四个表达显著下调的microRNA,分别为miR-20a-5p、miR-20b-5p、miR-106b-5p和miR-144-3p。qPCR验证结果显示,与对照组相比,4种miRNA表达均显著下调。2.由mirSVR score和PhastCons score得分我们进一步筛选出可能对FOXO1 3?UTR作用较大的microRNA,即miR-144-3p。Luciferas活性实验证实,miR-144-3p直接靶向结合FOXO1 3?UTR。3.SHR PFC中miR-144-3p和FOXO1的表达水平明显低于WKY大鼠。旷场实验中,miR-144-3p-virus组大鼠穿越的格子数和用后肢站立的次数明显低于对照组;迷宫实验中,miR-144-3p-virus组穿过拐角数和用后肢站立的次数明显低于对照组。取PFC检测miR-144-3p和FOXO1的表达量,结果显示,与对照组相比miR-144-3p-virus组miR-144-3p明显升高而FOXO1明显降低。4.PC12L细胞FOXO1 mRNA表达显著高于PC12H细胞。miR-144-3p-virus组PC12L细胞突触长度显著高于对照组。结论1.miR-20a-5p、miR-20b-5p、miR-106b-5p和miR-144-3p在ADHD患儿血清中表达显著降低,可为临床诊断ADHD提供一定依据。2.miR-144-3p通过靶向调节FOXO1 3?UTR影响TH表达及神经细胞分化,可能在ADHD发生发展过程中起重要作用。