LRH-1（肝脏受体同源物-1）又名NR5A2,是核受体家族的成员之一,作为转录激活子调控类固醇基因的表达,对类固醇激素的分泌及癌症因子的调控有重要作用。雌性哺乳动物的大多数卵泡都会发生闭锁,激素的调控也是卵泡闭锁的因素之一,而颗粒细胞的凋亡被认为是卵泡闭锁的主要机制,但LRH-1是否参与牛卵巢颗粒细胞的增殖凋亡调控仍需证实。越来越多研究表明孕酮受体PGR介导细胞的抗凋亡信号通路,孕酮（P₄）对雌性动物生殖组织的作用也是由PGR介导的。孕酮受体信号途径参与了卵巢发情周期和黄体化,并调控机体的卵巢发育、妊娠等重要活动。同时也与一些疾病,包括阿尔茨海默症、帕金森等密切相关。但目前未见有关LRH-1介导牛卵巢颗粒细胞的凋亡的相关报道,其调控机制也是未知的。通过特异性的小分子激活剂（DLPC（Dilauroyl Phosphatidylcholine）和P₄）激活LRH-1的表达和孕酮受体信号通路相关受体的表达,利用免疫组织化学、RT-qPCR、Western blot、ELISA、免疫荧光细胞法、Annexin V-FITC/PI及CCK-8等多种技术和方法,研究LRH-1对牛卵巢颗粒细胞类固醇激素合成途径及其对牛卵巢颗粒细胞的生理调控。试图阐明LRH-1调节卵泡发育的新机制,为后续研究卵巢功能提供科学依据,试验主要获得以下结果。1.本试验采用牛卵巢颗粒细胞体外无血清培养体系。分离培养的牛卵巢颗粒细胞纯度较高,分离率达到95.5%,免疫组织化学发现LRH-1在牛卵巢颗粒细胞中高表达。2.不同浓度的DLPC（50μM、100μM、125μM、150μM）处理牛颗粒细胞24h,ELISA检测颗粒细胞分泌孕酮、雌二醇及睾酮的含量。结果显示,不同浓度的DLPC均抑制孕酮（P₄）、雌二醇（E₂）的分泌,50μM和100μM DLPC抑制作用较为明显,有趣的是,150μM DLPC可以诱导睾酮（T）的分泌。这表明LRH-1激活会抑制牛卵巢颗粒细胞P₄、E₂激素的分泌。3.添加50μM DLPC显著促进LRH-1基因及蛋白的表达（P<0.05）;添加50μM DLPC上调AR、StAR的表达,100μM DLPC促进CYP19、HSD3β1、HSD17β1、ESR1、ESR2基因的表达,下调CYP17、CYP11的表达。这表明,LRH-1表达的上调,会调控类固醇合成途径相关基因（StAR、CYP11、CYP19、HSD3β1、HSD17β1、CYP17）及受体（AR、ESR1、ESR2）的表达。4.通过Western blot检测PPARγ蛋白表达,CCK-8检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡。试验结果揭示,不同浓度的DLPC抑制LRH-1的下游PPARγ蛋白的表达（P<0.05）。不同浓度的DLPC抑制牛卵巢颗粒细胞的增殖,50μM DLPC显著促进牛卵巢颗粒细胞的凋亡（P<0.05）。这表明LRH-1的上调,会抑制下游蛋白PPARγ的表达,促进细胞凋亡,抑制细胞增殖。5.LRH-1表达上调会显著抑制孕酮受体的表达（P<0.05）。免疫细胞荧光显示,50μM DLPC+10μM P₄显著提高PGR基因的表达（P<0.05）,但对孕酮受体膜蛋白（PGRMC1）表达无显著作用。CCK-8显示,50μM DLPC+（5μM P₄或10μM P₄）会显著提高牛颗粒细胞的细胞增殖（P<0.05）。Annexin V-FITC/PI表明,50μM DLPC+（5μM P₄或10μM P₄）会显著抑制牛卵巢颗粒细胞的凋亡（P<0.05）。利用Western blot检测凋亡蛋白的表达,50μM DLPC+（5μM P₄、10μM P₄或100μM P₄）显著抑制Cleaved-Capase3蛋白的表达（P<0.05）;50μM DLPC+（10μM P₄或100μM P₄）显著促进Bcl-2蛋白的表达（P<0.05）。试验结果表明,孕酮受体激活剂逆转了LRH-1对牛卵巢颗粒细胞凋亡的促进和细胞增殖的抑制作用。综上所述,LRH-1通过调节类固醇激素合成途径,抑制P₄的生物合成。此外,LRH-1通过抑制P₄/PGR信号,促进了卵巢颗粒细胞的凋亡,从而介导卵泡的闭锁。本试验的研究结果为后续卵泡发育机制研究提供了新的理论依据。