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急性肺损伤(Acute lung injury,ALI),及其重症形式急性呼吸窘迫综合征(Acute respiratory distress syndrome,ARDS)是一类死亡率高,难以治疗的危重症疾病。ALI/ARDS以肺泡弥漫性的损伤为病理特征,肺泡结构损伤引起的气血屏障的破坏会导致低氧血症和肺水肿的发生。在ALI/ARDS病理过程中,中性粒细胞在肺泡微环境的炎症和损伤过程中,起到了重要的促进作用。由于肺泡处于哺乳动物呼吸道解剖学的最末端,相应的体内研究手段较为局限。本研究中,我们利用与肺具有相似性的斑马鱼鱼鳔作为体内实时模型,来研究ALI中性粒细胞的浸润。我们发现,鱼鳔显微注射脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS),聚肌胞苷酸(Polyinosinic-polycytidylic acid,Poly IC)以及纳米硅颗粒(Nano-Si O2)等外源物质,可以显著地引起中性粒细胞向鱼鳔浸润,并且具有时间和剂量依赖性。中性粒细胞的动态追踪显示,LPS鱼鳔注射后中性粒细胞通过鳔管周围的毛细血管或者前肾管周边进入鱼鳔腔。LPS注射后,炎症因子的m RNA水平随着中性粒细胞在鱼鳔的聚集而升高。在LPS注射的鱼鳔中,显微成像显示出包括上皮屏障破坏,内质网肿胀和线粒体损伤在内的损伤的发生。在该模型中,抑制剂筛选实验结果表明,抑制Shp2可以缓解LPS引起的中性粒细胞的浸润。小鼠ALI模型中,Shp2抑制或者缺失均能缓解肺部中性粒细胞的浸润。我们将肺炎病人的支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)注射到鱼鳔中,检测中性粒细胞的浸润情况用于评价肺炎。结果显示,与对照组相比,BALF注射后会显著增加鱼鳔中中性粒细胞的数量。我们的研究表明,斑马鱼鱼鳔可以作为肺泡损伤机制研究和药物筛选的动物模型,酪氨酸磷酸酶Shp2可以调控中性粒细胞的迁移参与肺部急性炎症过程。外泌体是一种新型胞间通讯方式,广泛参与细胞间微环境的调控,与疾病的发生密切相关。但外泌体形成机制研究尚不深入,不同信号蛋白所调控的外泌体的功能差异也有待研究。激酶可磷酸化外泌体生成的调控蛋白,从而促进外泌体生成,但此过程的负向调控分子少见报道。广泛表达的酪氨酸磷酸酶Shp2,可通过去磷酸化参与多种细胞功能的调控。本研究发现,Shp2缺失或者抑制会显著增加外泌体的数量,提示Shp2是外泌体生成的负向调控蛋白。Shp2可以使外泌体生成关键蛋白Syntenin Y46去磷酸化,从而抑制外泌体的生成。体内和体外数据均显示,抑制Shp2功能可以增加上皮细胞外泌体的分泌。Shp2缺失引起的上皮细胞外泌体增多可以促进巨噬细胞M1型活化,从而促进炎症的进展。本研究探索了Shp2调控外泌体生成的分子机制,明确了上皮细胞外泌体异常增多对巨噬细胞的活化作用,有助于理解外泌体的形成机制以及上皮-巨噬微环境中外泌体的作用。本论文将分为两个部分,分别阐述Shp2在肺部急性炎症以及外泌体生成机制中的作用。