紫芽茶树花色苷富集特性及其高纯品制备技术研究

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花色苷是一类具有2-苯基苯并吡喃基本母核结构的植物次生代谢产物,具有抗氧化、清除自由基等多种生物活性,是近年天然产物开发利用领域的热点之一。茶树芽叶出现紫化主要是由茶树种质、发育特性及其生长环境条件等因素所引起的花色苷含量显著增加的抗逆生理表现。在传统茶叶加工中,由于以紫色芽叶加工而成的茶产品在干茶色泽、茶汤汤色及叶底等品质因子上呈紫色,而被认为是不适于加工茶叶的鲜叶原料并大多被浪费。随着人们对紫芽茶树花色苷研究的深入以及健康养生意识的增强,茶源花色苷的高值化利用越来越受到业界的关注。目前对茶源花色苷的研究主要集中于紫芽茶树品种选育、花色苷代谢调控以及粗提物制备、生物活性研究、健康产品开发等方面,但在茶树对花色苷的富集特性及其机制、花色苷组分分析方法以及花色苷高纯品制备等方面,尚有待于进一步探究。本研究以紫芽茶树品种(系)的新梢为研究对象,在建立紫芽茶树多种花色苷组分同时分析的HPLC方法的基础上,分析研究了不同茶树品种(系)、不同部位、不同生长季节对茶树紫色芽叶花色苷的富集特性,优化建立了紫芽茶树花色苷高纯品制备工艺技术,为后续紫芽茶树花色苷的高值化利用奠定了较好的基础。主要研究结果如下:1、以紫芽茶树品种(系)紫娟、自选9803、红芽佛手、安73新梢为研究对象,以矢车菊素-3-O-葡萄糖苷、天竺葵素-3-葡萄糖苷和飞燕草素-葡萄糖苷3种植物花色苷为外标,建立同时检测紫芽茶树中多种花色苷的HPLC分析方法,即:茶叶经酸性80%乙醇回流提取后,以正己烷︰乙酸乙酯︰水体积比为1︰1︰2的混合溶剂脱脂,采用C18色谱柱,以乙腈和0.2%磷酸超纯水作流动相梯度洗脱,有机相洗脱梯度为:055 min,10%40%,流速0.8 mL/min、柱温30℃、紫外检测波长520nm,各花色苷组分可有效分离,标准曲线相关系数均≥0.99,线性范围为5.0075.00μg/L,该方法精密度、重复性良好,稳定性相对标准偏差值≤10%,加标回收率为75%88%;4种紫芽茶树样品中的7种主要花色苷组分均得到有效分离。该方法具有快速、灵敏、准确、成本低的特点,同时是一种可用于同时检测分析紫芽茶树中多种花色苷组分的分析方法。2、以红芽佛手、自选9803、安73三个易紫芽化茶树品种(系)的新梢为原料,采用紫外-可见光谱和高效液相色谱技术,分析研究了不同茶树品种(系)、不同部位、不同生长季节对紫芽茶树花色苷的富集特性。结果表明,茶树不同品种(系)、不同部位、不同生长季节对花色苷总量的富集存在显著差异(P<0.05);不同品种(系)富集能力依次为自选9803>安73>红芽佛手,不同部位富集能力依次为一叶>二叶>芽头>三叶,同时三个品种(系)随春末、夏初、夏中、夏末、秋初、秋中的季节变化对花色苷的富集呈现出先上升后下降的趋势,自选9803叶片在夏中花色苷含量达到最高值16.01mg/g,安73在夏末达到最大值12.18mg/g,红芽佛手则在夏初达到最高值7.8mg/g。3、以自选9803紫色芽叶为原料,经酸性乙醇提取、有机溶剂萃取脱脂,阳离子交换树脂去杂等前处理工艺,优化建立了通过高速逆流色谱、制备型高效液相色谱来制备紫芽茶树花色苷高纯品的工艺技术,结果表明,采用体积比为乙酸乙酯:正丁醇:乙腈:0.1%三氟乙酸水=0.8:3.5:1.3:6的高速逆流色谱分离的溶剂体系,以及采用C18柱(20×250 mm,10μm)制备柱、波长280nm、流动相1%醋酸(A)-乙腈(B)梯度洗脱(055 min,1040%B)、流速5mL/min、进样量为1mL的制备型液相色谱条件,分段收集洗脱液并经浓缩、干燥,可获得5种花色苷组分提取物,其中组分4的纯度达90%,根据文献和各组分出峰时间,推测组分4为飞燕草素-3-O-(6-(E)对香豆酸)吡喃半乳糖苷。
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