水稻T-DNA插入突变体筛选及其功能的初步分析

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  本研究利用农杆菌介导法现已建立了3000多个独立的水稻T-DNA标签株系。通过对3000多个独立插入系的T1代的初步筛选,现已获得208个具有表型变异的突变体,突变形状如株高矮化、假病斑、叶子畸形、颖花结构变异、不分蘖、鞘包穗、脆叶、叶白化、颖花着色、育性低等,其中矮杆突变表型居多;T1代选取表型分离比例接近3:1的53个株系,经过扩大种植群体后的遗传学和分子生物学分析,已初步认定有2个突变体:P1155、P1424的表型与T-DNA为共分离。经过对T-DNA插入侧翼序列的分析,初步推测P1424突变体是由于T-DNA插入到生长素诱导蛋白基因中而导致的,而P1155突变体是由于T-DNA插入一个未知基因而引起的。 本实验还对以前已被证明与T-DNA具有共分离关系的A1473矮杆突变体进行研究,根据T-DNA插入位点附近基因的预测及RT-PCR分析和未知功能基因的编码序列,构建了互补载体和表达载体,通过农杆菌介导转化来验证基因的功能。目前已获得转基因烟草,转基因水稻正在进行中;为了证明矮杆突变体是否与GA生物合成有关,对该突变体的两个指标进行测定,结果表明叶绿素含量明显比对照高,喷施GA的实验正在进行。对A1473突变体基因的克隆及生理生化分析,为以后更好的在生产上应用该矮杆基因及表型,具有重大意义。
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