论文部分内容阅读
子宫内膜癌是常见的妇科恶性肿瘤之一,治疗方法主要包括手术、放疗、化疗、激素等,其中化疗是治疗子宫内膜癌的重要辅助治疗手段。目前常用的治疗方案是以铂类为基础的联合化疗,虽然在一定程度上可延长患者生存期,但肿瘤细胞产生的耐药性及化疗不良反应,是导致子宫内膜癌复发及治疗失败的主要原因,因此,探索治疗子宫内膜癌的靶向药物具有重要意义。环巴胺（cyclopamine,CYP）是Shh（Sonic hedgehog）信号通路的特异性阻断剂,通过改变Shh通路组分Smo（smoothened）的空间结构而抑制Smo的活性,直接阻断Shh信号通路的激活,阻止其下游靶基因表达。目前,已在多种肿瘤中证实CYP可抑制肿瘤细胞增殖。有报道证实CYP可抑制子宫内膜癌细胞系Ishikawa及HHUA细胞的增殖,但CYP对人子宫内膜癌HEC-1A细胞的抑制作用及相应调控机制尚无报道。本实验通过体外培养人子宫内膜癌细胞HEC-1A,采用0、5、10、20、40μmol·L-1不同剂量的CYP处理HEC-1A细胞24 h,48 h或72 h后,倒置显微镜及瑞氏吉姆萨染色观察细胞形态改变,AO/EB双染法观察死亡细胞,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术AnnexinⅤ-FITC/PI法检测细胞发生的凋亡率,Q-PCR法检测Bax和Bcl-2基因的表达水平,划痕实验检测细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞周期及细胞自噬相关蛋白LC3-B的表达,蛋白质印迹法（Western blot）检测LC3-B蛋白表达水平。结果表明:不同剂量的CYP处理HEC-1A细胞可使细胞形态发生明显改变,且具有CYP时间浓度依赖性;AO/EB染色结果表明,CYP可诱发HEC-1A细胞大量死亡;CCK-8结果显示,CYP可显著抑制HEC-1A细胞的增殖（P<0.05）;流式细胞术检测结果发现CYP可导致HEC-1A细胞凋亡,且随着CYP剂量的升高HEC-1A细胞发生凋亡的比率显著提高（P<0.05）;Q-PCR检测凋亡相关基因表达,结果显示,CYP处理可诱导HEC-1A细胞上调Bax基因表达,下调Bcl-2基因表达;CYP处理组HEC-1A细胞的迁移能力显著下降（P<0.05）;CYP可使HEC-1A细胞周期阻滞于G0/G1期;并可诱导HEC-1A细胞内LC3-B蛋白聚集,且呈时间-剂量依赖性;LC3-B蛋白表达水平随CYP浓度增加而增高。结论提示:CYP可抑制人子宫内膜癌细胞HEC-1A的存活并诱导其发生凋亡,同时可阻滞细胞周期运转,引发细胞自噬并抑制迁移。