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1.目的:
分析MS4a4B(membrane-spanning4-domain family,subfamily A,member B)对C57BL/6小鼠T细胞的作用,检测并观察Anti-MS4a4B作用于实验性自体免疫性脑脊髓炎小鼠临床表现、组织学及生化指标的影响。探讨MS4a4B及其抗体Anti-MS4a4B在EAE模型中的作用,为Anti-MS4a4B用于多发性硬化的治疗提供实验依据。
2.方法:
2.1 T细胞实验——用siMS4a4B或siLuc的siRNA转染C57BL/6小鼠CD4+细胞,检测细胞中caspase-3,caspase-8和caspase-9的表达。检测转染细胞中Fas,FasL和Annexin-V的表达。
2.2 EAE实验——C57BL/6小鼠通过MOG/PTX/CFA方式诱导为实验性自体免疫性脑脊髓炎后,通过对小鼠进行Anti-MS4a4B和IgG的注射,对比实验组与对照组的神经功能评分。检测:小鼠外周血中CD3+和CD4+的实际细胞数;外周血中Treg的相对含量;小鼠脊髓中Treg,IL-17和IFN-Y的百分比;MOG刺激后诱导脾细胞细胞增殖的情况;MOG刺激刺激诱导的脾细胞细胞因子的产生情况;对比小鼠脊髓组织切片的情况。通过以上实验对比验证Anti-MS4a4B的作用。
3.结果:
MS4a4B-沉默增加了T细胞凋亡,与凋亡相关的caspase蛋白的表达增强。与IgG对照组相比,Anti-MS4a4B注射组EAE小鼠的临床评分明显降低,同时体内CD3+和CD4+细胞数量明显下降。其脊髓中IL-17和IFN-γ降低。注射Anti-MS4a4B后,MOG刺激下的小鼠脾细胞增殖下凋,细胞因子分泌下降。脊髓切片显示,与对照组相比,注射Anti-MS4a4B可以减少炎症浸润。
4.结论:
EAE小鼠的症状得到显著缓解,Anti-MS4a4B治疗能够降低EAE小鼠的神经损伤。MS4a4B可以降低T细胞的活性,并成为治疗自体免疫疾病MS的潜在治疗途径。