电针对DNFB诱导的AD小鼠瘙痒行为学及免疫学、GRPR/TRPs血清信号通路影响的研究

来源 :陕西中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:caozhi7963
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【目的】特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)是一种反复发作的慢性、炎症性皮肤疾病,好发于婴幼儿,病程长,可迁延至成年。特应性皮炎除引发皮肤炎症外,其引起的慢性瘙痒对患者的生长发育、生活质量和心理健康造成严重影响。临床上对于特应性皮炎的治疗仍以糖皮质激素作为首选的治疗方法之一,但应用糖皮质激素可能出现的不良反应以及副作用令患者有诸多顾虑;对于特应性皮炎引起的慢性瘙痒,传统的抗组胺疗法效果不佳。针灸作为在传统中医基础理论指导下的外治法,因其相对安全而日益受到医患的关注。现代医学将脉冲电与传统针灸相结合,疗效好,易推广。本实验拟探寻电针“曲池”、“合谷”对AD是否有效及其机制。【方法】选择C57BL/6J小鼠,采用2,4-二硝基氟苯(DNFB)背部刺激诱导AD模型。24只C57BL/6J小鼠采用随机数字表法分为模型组、电针组、假电针组和空白对照组。模型组、电针组和假电针组采用0.15%DNFB涂抹于背部剃毛区诱导AD模型,空白对照组在相同区域以不含DNFB的丙酮处理。电针及假电针组于第2次DNFB刺激至第9次DNFB刺激间针刺合谷、曲池穴,电针组连通电针仪,假电针组仅作针刺处理,隔日1次。模型组与空白对照组正常饲养,不予干预,于电针组和假电针组接受治疗同时做同样的抓取。末次行为学记录结束后进行取材。(1)实验过程中对小鼠皮损进行评分,记录小鼠搔抓次数观察各组小鼠疾病进程和行为学影响。(2)HE染色法观察各组小鼠皮肤组织形态学改变。(3)ELISA法检测小鼠血清IgE、IL-5、ECP含量。(4)Western Blotting检测小鼠背根神经节(DRG)中的TRPV1、TRPA1蛋白表达水平。(5)PCR检测小鼠脊髓中GRPR/TRPs和皮肤组织TRPs的mRNA水平。【结果】(1)试验结束,可见电针组、假电针组小鼠背部皮肤红斑消退,渗出减少,偶见少量痂皮,皮损表现较模型组小鼠明显改善。对小鼠皮损进行评分,结果显示电针组、假电针组皮损评分与模型组相比差异显著(P<0.01)。(2)与模型组相比,电针组、假电针组搔抓次数显著降低(P<0.01),差异有统计学意义;电针组与假电针组小鼠搔抓次数比较无显著差异(P>0.05);电针组与空白对照组相比,搔抓次数无显著差异(P>0.05);假电针组搔抓次数相比空白对照组有显著差异(P<0.01)。(3)HE染色可见模型组小鼠皮损表皮可见明显增生,棘层肥厚,伴海绵水肿,角质层出现角化或角化不全,表皮和真皮层出现大量炎性细胞(中性粒细胞和淋巴细胞为主)浸润,并伴随血管扩张、充血,符合AD组织病理学改变,表示造模成功。电针组及假电针组可见表皮可见不同程度的增生及炎性细胞浸润,细胞水肿明显减轻。空白对照组小鼠表皮、真皮结构正常,未见皮损增生、变厚,无水肿、充血及淋巴细胞浸润。(4)血清IgE水平:与模型组相比,电针组、假电针组血清IgE水平显著降低(P<0.01);与假电针组相比,电针组血清IgE水平有显著差异(P<0.01)。血清IL-5水平:与模型组相比,电针组、假电针组血清IL-5水平有差异,有统计学意义(P<0.05);与假电针组相比,电针组血清IL-5水平无明显差异(P>0.05)。血清ECP水平:与模型组相比,电针组、假电针组血清ECP水平有差异,有统计学意义(P<0.05);与假电针组相比,电针组血清ECP水平有差异(P<0.05)。(5)小鼠DRG中TRPA1的表达:电针组与假电针组对比模型组差异具有统计学意义(P<0.05),两治疗组有效。小鼠DRG中TRPV1的表达:电针组与假电针组对比模型组差异具有统计学意义(P<0.05),两治疗组有效。(6)小鼠脊髓中GRPR的mRNA水平:电针组与假电针组对比模型组差异具有统计学意义(P<0.01),两治疗组有效。小鼠脊髓中TRPV1的mRNA水平:电针组与假电针组对比模型组差异具有统计学意义(P<0.01),两治疗组有效。小鼠脊髓中TRPA1的mRNA水平:电针组与假电针组对比模型组差异具有统计学意义(P<0.05),两治疗组有效。(7)小鼠皮肤组织中TRPV1的mRNA水平:电针组与假电针组对比模型组差异具有统计学意义(P<0.01),两治疗组有效。小鼠皮肤组织中TRPA1的mRNA水平:模型组对比空白对照组有差异(P<0.05),造模成功;电针组与假电针组对比模型组差异不具有统计学意义(P>0.05)。【结论】1.电针曲池、合谷穴能够明显改善AD小鼠皮损状态,减少小鼠搔抓次数,降低血清IgE及炎性因子的水平,TRPs的蛋白表达及脊髓中GRPR/TRPs和皮肤组织TRPs的mRNA水平。2.电针曲池、合谷可能是通过激活C类纤维,降低血清IgE及炎性因子的水平,同时降低了TRPs的蛋白表达及脊髓中GRPR/TRPs和皮肤组织TRPs的mRNA水平,改变神经细胞膜内外的Ca2+的分布,抑制神经细胞兴奋性,达到止痒的效果,改善AD皮损状态。
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