【摘 要】
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目的:针对肿瘤的化疗和放疗传统疗法靶向性差的缺点,本研究构建一种新型的双特异性纳米抗体HER2和VEGFR2,以更好的为肿瘤患者提供有效的治疗策略。方法:在大肠杆菌BL21(DE3)
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目的:针对肿瘤的化疗和放疗传统疗法靶向性差的缺点,本研究构建一种新型的双特异性纳米抗体HER2和VEGFR2,以更好的为肿瘤患者提供有效的治疗策略。方法:在大肠杆菌BL21(DE3)中表达目的蛋白;用渗透压休克法提取周质蛋白;通过镍柱纯化目的蛋白;采用流式细胞术分析纳米抗体与结直肠癌表面抗原的结合能力;运用表面离子共振技术SPR检测纳米抗体和抗原之间的亲和力情况;在体外实验中,利用CCK8试剂盒验证纳米抗体抑制肿瘤细胞增殖的能力,用Graphpad Prism软件计算IC50值;采用细胞凋亡试剂盒分析纳米抗体诱导细胞凋亡的能力,用Mod Fit LT软件对细胞凋亡进行相对定量分析。结果:在大肠杆菌成功的表达了目的蛋白,2D3和3VGR19-3的分子量大小为15KDa;2D3+3VGR19-3的分子量大小为28KDa;用SPR法检测了抗体和抗原两者之间的解离常数,双特异性纳米抗体分别与抗原HER2和抗原VEGFR2结合的KD值为2.838E-9M和3.132E-9M;在CCK8实验中,纳米抗体能够呈剂量依赖性的抑制肿瘤的生长,在细胞凋亡实验中,我们所构建的纳米抗体能诱导细胞凋亡,双特异性纳米抗体使HT29细胞的凋亡率从6.5%(早期凋亡3.75%+晚期凋亡2.93%)显著增加到约55%。结论:我们构建的纳米抗体显示了有效的生物学功能,双特异性纳米抗体比单个纳米抗体的抗癌活性更强,根据以上实验的分析,通过阻断双靶点通路(HER2/VEGFR2)发挥的抗肿瘤效果高于单靶点通路。
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