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研究背景:旋毛虫病是一种呈全球性分布的食源性寄生虫病,不仅危害人类健康,而且严重影响畜牧业的生产与发展。旋毛虫感染所激发的免疫反应是多种免疫因素相互调节的过程。针对旋毛虫的感染免疫已在细胞及细胞因子水平有所研究,但旋毛虫感染中分泌相关细胞因子的CD4~+T细胞各亚群的动态变化尚未见系统报道。目的:探明CD4~+T细胞各亚群Th1、Th2、Th9、Th17、Treg、CD4~+IL-22~+T细胞及其相关细胞因子在旋毛虫感染中的动态变化规律,为更深入研究旋毛虫感染后的宿主免疫机制和旋毛虫病的致病机制提供实验依据。方法:1.建立旋毛虫感染小鼠模型:取已感染河南猪源旋毛虫的昆明鼠,通过人工胃蛋白酶消化法收集旋毛虫肌幼虫,感染组Balb/c小鼠经口感染300条肌幼虫,对照组给予等量生理盐水。2.流式细胞术检测Th1、Th2、Th9、Th17、Treg、CD4~+IL-22~+T细胞的比例:分别于旋毛虫感染后0天、2天、5天、7天、14天、21天、28天、42天、56天各时间点取感染组与对照组小鼠的脾脏组织和肠系膜淋巴结组织,以流式细胞术检测脾脏和肠系膜淋巴结CD4~+T细胞中Th1、Th2、Th9、Th17、Treg、CD4~+IL-22~+T细胞的比例。3.ELISA检测血清中各细胞因子的含量:将上述各时间点留取的血清,用ELISA的方法检测其中IFN-γ、IL-4、IL-9、IL-17、IL-10、TGF-β、IL-22等细胞因子的含量。结果:1.旋毛虫感染后Th1细胞亚群的动态变化:感染组脾脏Th1细胞亚群的比例在感染后第7天即达到最高峰,在感染后第14天时明显下降,此后维持在稳定水平,于感染后第42天时下降至最低值,而感染后第56天又可见升高。感染组脾脏Th1细胞亚群的比例在感染后第7天至第56天,与正常组相比均升高(P<0.05)。感染组肠系膜淋巴结中Th1细胞亚群的比例在感染后第2天即开始升高,至感染后第7天时达到最高峰,此后开始下降,在感染后第14天下降至最低值后,在感染后第21天再次升高,此后维持稳定水平至感染后第28天,在感染后第42天继续下降,此后维持在正常水平。感染组肠系膜淋巴结中Th1细胞亚群比例在感染后第2天至第28天相比于正常组均明显升高(P<0.05),在感染后第42天至第56天相比于正常组差异无统计学意义(P>0.05)。2.旋毛虫感染后Th2细胞亚群的动态变化:感染组脾脏Th2细胞比例在感染后第2天即开始升高,感染后第7天达到峰值,而后逐渐下降,在感染后第21天下降至正常水平,此后维持在正常水平。感染组脾脏Th2细胞比例在感染后第2天至第14天相比于正常组均升高(P<0.05),在感染后第21天至第56天相比于正常组差异无统计学意义(P>0.05)。感染组肠系膜淋巴结中Th2细胞比例在感染后第2天即可升高,此后下降,在感染后第5天至第14天维持在高于正常组的稳定水平(P<0.05),随后继续升高,至感染后第21天达最高值,此后急剧下降,至感染后第28天恢复至正常水平(P>0.05),在感染后第42天升高至高于正常组水平(P<0.05),在感染后第56天,再次恢复至正常水平(P>0.05)。3.旋毛虫感染后Treg细胞的动态变化:感染组脾脏Treg细胞比例在感染后第5天升至最高峰,此后下降,在感染后第7天至第42天维持在高于正常组的稳定水平(P<0.05),至感染后第56天明显下降至正常水平(P>0.05)。感染组肠系膜淋巴结中Treg细胞比例在感染后第2天即可升高,在感染后第5天达到最高值,而后下降,在感染后第14天至第42天维持在高于正常组的稳定水平(P<0.05),而在感染后第56天时下降至正常水平(P>0.05)。4.旋毛虫感染后Th17细胞亚群的动态变化:感染组脾脏Th17细胞比例在旋毛虫感染后第7天开始升高,在感染后第14天上升至最高值,此后开始下降,在感染后第21天至第56天维持在高于正常组的稳定水平。感染组脾脏Th17细胞比例在感染后第7天至第56天,相比于正常组均明显升高(P<0.01)。感染组肠系膜淋巴结Th17细胞比例在感染后第2天即升高到最高峰,之后快速下降,至感染第7天时恢复至正常水平(P>0.05),此后Th17细胞比例再次升高,至感染后第28天达到峰值,而后快速下降,至感染后第56天恢复至正常水平(P>0.05)。5.旋毛虫感染后Th9细胞亚群的动态变化:感染组脾脏Th9细胞比例在感染后第2天至第21天逐渐升高至最高值,而后急剧下降,在感染后28天下降至正常水平(P>0.05),在感染后第42天至第56天又可见Th9细胞比例升高至高于正常组水平(P<0.05)。感染组肠系膜淋巴结Th9细胞比例于感染后第14天开始升高,至感染后第21天升高至最高峰,在感染后第28天恢复至正常水平后(P>0.05),于感染后第42天再次升高至高于正常组水平(P<0.01),而在感染后第56天下降至正常水平(P>0.05)。6.旋毛虫感染后CD4~+IL-22~+T细胞亚群的动态变化:感染组脾脏CD4~+IL-22~+T细胞比例在旋毛虫感染后第5天即开始升高,在感染后第7天下降至正常水平(P>0.05),此后升高,在感染后第14天至第56天维持在高于正常组的稳定水平(P<0.05)。感染组肠系膜淋巴结CD4~+IL-22~+T细胞比例在旋毛虫感染第14天时急剧上升,至感染后第21天达到最高峰,此后快速下降,并维持在正常水平(P>0.05)。7.旋毛虫感染后血清中相关细胞因子水平的变化:血清IFN-γ水平在感染后第7天快速上升至最高峰,之后开始下降,在感染后第14天至第21天维持在稳定水平,而后快速下降,但仍高于正常水平(P<0.05)。血清IL-4水平在感染后第2天急剧上升至最高峰,而后逐渐下降,在感染后第28天下降至正常水平(P>0.05),在旋毛虫感染后第42天又可见升高,至感染后56天下降至正常水平(P>0.05)。血清IL-10水平在感染后第2天即可上升,此后维持在稳定水平,在感染后第14天继续上升至最高峰,此后逐渐下降,在感染后第28天下降至正常水平(P>0.05),此后逐渐上升,在感染后第56天高于正常水平(P<0.05)。血清TGF-β水平在旋毛虫感染后第2天开始下降,感染后第5天下降至最低值,此后开始回升,在感染后第7天即升高至正常水平(P>0.05),此后继续上升,在感染后第21天升高至最高峰,而后下降,在感染后第28天下降至正常水平(P>0.05),在感染后第42天再次上升至高峰,此后维持稳定水平。血清IL-17A水平在旋毛虫感染后第14天至第42天逐渐升高至最高峰,在感染后第56天下降至正常水平(P>0.05)。血清IL-9水平在旋毛虫感染后第5天即开始升高,至感染后第21天达到峰值,而在感染后第28天明显下降,但仍高于正常水平(P<0.01),在感染后第42天再次升高,此后维持在稳定水平。血清IL-22水平在旋毛虫感染后虽有波动,但各检测点间IL-22水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.初步探明旋毛虫感染后脾脏、肠系膜淋巴结的Th1、Th2、Th9、Th17、Treg、CD4~+IL-22~+T细胞及血清中相关细胞因子的动态变化规律。2.除肠系膜淋巴结Th9、CD4~+IL-22~+T细胞在旋毛虫感染病程中后期增高外,其余CD4~+T细胞亚群在旋毛虫感染病程早期(一周内)即开始显著升高,但其动态变化特征各不相同,说明旋毛虫感染免疫病理过程是Th1、Th2、Th9、Th17、Treg、CD4~+IL-22~+T细胞等CD4~+T细胞各亚群综合作用的结果。3.旋毛虫感染后脾脏与肠系膜淋巴结CD4~+T细胞亚群动态变化特征不同,说明旋毛虫感染后系统免疫与肠道局部免疫存在一定差别,可能各自在旋毛虫病免疫病理过程中发挥重要作用。