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天麻属兰科植物天麻(Gastrodia elataB L)的干燥块茎,为传统的名贵中药材。天麻主要用于治疗诸如风湿病,瘫痪不遂,肢体麻木,小儿惊风,头痛等症,具有明显的镇静、抗惊厥、抗炎镇痛、抗衰老,能改善学习记忆、具有很强的免疫功能。虽然天麻在我国已有两千多年的使用历史,但迄今仍以天麻原药材制成的中成药较多,对其有效成分的研究尚待深入。
天麻是云南省主产药材之一,现已进行大规模的人工栽培,目前主要为满足全国饮片市场需要。随着天麻栽培技术的提高,改变了过去天麻药材紧缺的情况,为了更好地开发、利用云南的天麻药材资源,提高产品经济附加值和科技含量,在提取时如何能保证有效成分最大限度地被分离、纯化,以保证其疗效是迫切要解决的问题。同时对天麻这一名贵中药多肽进行分离、纯化,可以为天麻药理的研究和新药研发奠定基础。也为以后对天麻的进一步开发利用打下坚实的基础。目前,有关天麻的开发利用主要集中在天麻素上,而在天麻多肽方面的研究较少,对天麻多肽的分离纯化方法的研究还是一片空白。
本研究以云南省昭通市彝良县小草坝的新鲜天麻做材料,采用高速离心、超滤、凝胶过滤、蛋白质快速液相层析(FPLC)、反相高效液相色谱(RP-HPLC)等方法对天麻中的多肽进行分离、纯化得到分子量分别为2900左右和2600左右的两种小肽(分子量介于1-3k Da)。将获得的两种小肽进行氨基酸的组成分析,得到它们的氨基酸组成。从而填补了天麻多肽的分离纯化方法的研究的空白。试验表明:(1)本研究中所建立的的技术体系完全适用于从天麻中分离提取其中的多肽,并可以将多肽有效的纯化得到较高的纯度。(2)根据天麻的含量,在0.50~7.25 mg/mL质量浓度范围内绘制标准曲线,得到的线性方程为y=0.55x+739.51,可直接通过测量吸光度读取天麻样品含量,方便快速,又节约了成本。(3)用纯净水溶解小肽和反相高效液相色谱中用0,05%TFA+20%乙腈水溶液取代0.05%TFA+60%乙腈水溶液效果很好,证明了此肽有很强的亲水性。(4)在RP-HPLC过程中,流动相为0.05%TFA,低pH不影响相的稳定性。用含有TFA的;乙腈-水溶液梯度洗脱肽混合物,每种肽都可恢复原性,最低在96%以上。这些将为以后进一步开发、利用天麻和进行新药研发提供试验依据。