桑叶DNJ和多糖的提取分离及活性研究

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本论文研究了以桑叶为原料,水为溶剂,从桑叶中提取1-脱氧野尻霉素(DNJ)和多糖,并对提取物进行纯化和降血糖功能性验证。   1.DNJ和多糖测定方法的研究。DNJ的测定方法为:以wager试剂为显色剂,用紫外分光光度计扫描检测,得出其最佳吸收波长为284nm。多糖的测定方法为:以蒽酮-硫酸为显色剂,用紫外分光光度计在620nm处扫描检测。   2.热水提取DNJ和多糖工艺的研究。实验表明DNJ的最佳提取工艺为:料液比1:30、物料粒径60目、温度70℃,时间3h,DNJ的得率为0.088%,固形物中DNJ纯度为21.3%;多糖最佳提取工艺为:固液比1:40,物料粒径60目,温度80℃,时间2.5 h,多糖的得率为2.27%,固形物中多糖纯度为28.7%。   3.超声波提取DNJ和多糖工艺的研究。在热水提取的基础上对桑叶追加超声波强化处理,得出DNJ的最佳提取工艺为:超声功率125W,料液比1:40,温度70℃,超声时间20min,DNJ的得率为0.092%,固形物中DNJ纯度为27.4%;多糖的最佳提取条件为:料液比1:30,温度80℃,超声功率125W,超声时间40min,多糖的得率为2.52%,固形物中多糖纯度为36.6%。   4.不同季节的桑叶中DNJ和多糖的含量考察。实验结果表明:DNJ的含量与生长的季节有关,3-5月份的含量较低,6月份逐渐增高,8月份最高,9、10月份又逐渐降低,说明DNJ的含量与气候有关,桑叶中DNJ的含量可能是温度越高,含量越大;多糖的含量是随着月份的推移而增高的,11月份的桑叶多糖含量较高。   5.大孔树脂吸附法纯化DNJ的研究。实验结果表明:纯化DNJ的最佳工艺为:以DXA-6树脂装柱、pH10、原液浓度0.352mg/ml、流速2.0BV/h条件下吸附,80%乙醇溶液以2.5BV/h的流速洗脱,解析率可达到85.5%。通过纯化DNJ的纯度由21.3%增加到61.6%。   6.大孔树脂吸附法纯化多糖的研究。试验结果表明:纯化多糖的最佳工艺为:以DXA-6树脂装柱、pH5、原液浓度0.706mg/mL流速2.0BV/h条件下吸附,以蒸馏水作为洗脱剂,2.0BV/h的流速洗脱,解析率可达83.2%,多糖纯度由27.4%增加到71.3%。   7.桑叶提取液和多糖的降血糖活性的研究。实验以昆明种小鼠为试验对象,采用四氧嘧啶造模,灌胃实验所得的桑叶提取液和桑叶多糖。结果表明:桑叶提取液与多糖能有效降低糖尿病小鼠的血糖。
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