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蓝舌病(Bluetongue disease, BT)是由蓝舌病毒(Bluetongue virus, BTV)引起的非接触性虫媒传染病。绵羊、山羊、牛等家畜和野生反刍动物对该病毒易感,由于感染的血清型不同其临床表现也不尽相同,主要临床症状为高热、舌头变蓝和口腔粘膜水肿出血等。BTV主要分布在热带、亚热带和温带国家,与其节肢动物宿主的分布范围一致,该病毒主要通过库蠓等的叮咬进行传播。BTV属于呼肠孤病毒科环状病毒属,病毒粒子呈二十面体对称,无囊膜。该病毒的基因组由10个分节段的双链RNA组成,编码7种结构蛋白(VP1～VP7)和5种非结构蛋白(NS1～NS4和NS3a)。VP2和VP5蛋白构成了病毒的外层衣壳,其中VP2是主要型特异性抗原,对蓝舌病的血清型起决定性作用。本研究根据Genbank中已登录的血清3型蓝舌病病毒(BTV3) L2基因的OFR序列(登陆号：No.AJ585124)设计一对特异性引物,从感染BTV3的BHK-21细胞沉淀中提取RNA,然后进行RT-PCR扩增L2基因；将扩增后的L2基因分别克隆到原核表达载体pMal-c4X和真核表达载体pFastBacHTA上,获得原核重组VP2蛋白MBP-VP2和真核重组VP2蛋白His-VP2。为制备抗BTV3VP2蛋白的单克隆抗体(MAb),用pMAL-C4X原核表达系统表达、纯化的重组VP2蛋白MBP-VP2免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,以并以Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达、纯化的重组VP2蛋白为包被抗原,通过间接ELISA筛选出两株稳定分泌抗BTV3VP2蛋白的MAb杂交瘤细胞株,分别命名为2F8和4E8。分别用western-blot和间接免疫荧光(IFA)对2F8和4E8进行鉴定,western-blot鉴定结果表明2F8和4E8都可以与BTV3的VP2蛋白反应；IFA鉴定结果表明,2F8和4E8都可以与BTV3发生特异性反应,但是与其他血清型BTV (BTV1-2,4-24)不反应。利用肽扫描技术,表达重叠短肽对2F8和4E8的抗原表位进行鉴定,其中2F8识别的表位为466EMIQSVIDDGWDQ478,4E8识别的抗原表位为5(?)SQVFPSYYNKWT520°将MAb2F8和4E8所识别的抗原表位序列与其他血清型的BTV VP2蛋白相应区段进行Blast比对结果表明,2F8和4E8的抗原表位是BTV3VP2特异性的抗原表位,与其他血清型的BTV同源性较低。我国目前尚没有针对BTV3VP2蛋白制备特异性单克隆抗体的相关报道,本研究制备的两株单克隆抗体以及对其针对的抗表位的研究,为了解BTV3VP2蛋白的结构和功能奠定了一定的基础并且为研究表位疫苗提供一定的物质储备。