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目的: (1)研究脂代谢相关基因,甾体激素受体共活化物(steroidreceptorcoactivator,SRC)-3及12/15脂肪酶(12/15-lipoxygenase,12/15-LO)调控核因子,过氧化物酶体增殖体受体(peroxisomeproliferator-activatedreceptor,PPAR)β/δ表达的作用途径。(2)确立SRC-3及12/15-LO通过影响PPARβ对中枢神经系统(centralnervoussysterm,CNS)炎症性疾病的调控方式。(3)阐明SRC-3及12/15-LO通过小胶质细胞调节CNS炎症的作用机制,为发现以PPARβ/δ调节CNS炎症性疾病的治疗策略提供理论依据及实验基础。 方法: (1)通过SRC-3基因敲除及野生型小鼠建立实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(experimentalautoimmuneencephalomyelitis,EAE)模型,利用EAE临床评分、组织化学染色、流式细胞术等方法,探讨SRC-3基因敲除对小鼠EAE的影响作用。(2)利用3H掺入、ELISA、过继转移模型及实时定量PCR等方法,探讨SRC-3基因敲除对EAE疾病作用的相关机制。(3)通过12/15-LO抑制剂黄芩素(baicalein,BA)及溶剂对照处理小胶质细胞系BV2,利用实时定量PCR及免疫印迹等方法,探讨BA对PPARβ表达的调控作用及机制。(4)通过BA及溶剂对照处理EAE小鼠,利用EAE临床评分、组织化学染色、流式细胞术、实时定量PCR等方法,探讨BA对EAE的调控作用,分析BA对CNS炎症的调控途径。(5)通过免疫荧光、实时定量PCR及免疫印迹等方法,研究BA调控PPARβ表达对小胶质细胞活性的影响,阐明BA调控EAE的细胞学及分子学机制。 结果: (1)SRC-3基因敲除较对照组显著抑制EAE病程中CNS内炎症细胞的浸润及脱髓鞘情况,而SRC-3基因敲除对EAE的缓解作用不是通过直接抑制外周炎症性细胞的反应性。(2)SRC-3基因敲除较对照组显著促进小胶质细胞PPARβ/δ的表达。(3)12/15-LO抑制剂BA较对照处理显著促进小胶质细胞PPARβ/δ,而抑制PPARγ的表达,并且BA对PPARβ/δ的促进作用是通过抑制12/15-LO实现的。(4)BA较对照处理有效缓解小鼠EAE病情,表现为显著降低的CNS内炎症性细胞的浸润及脱髓鞘情况。BA对EAE的缓解作用不是通过直接抑制外周炎症性细胞的反应性。(5)BA较对照处理显著升高EAE小鼠CNS内PPARβ/δ的表达。(6)BA较对照处理显著升高小胶质细胞PPARβ/δ的表达,并通过诱导小胶质细胞PPARβ/δ抑制小胶质细胞的活化,降低小胶质细胞炎症介质的表达,从而缓解EAE病情。 结论: 通过SRC-3基因敲除及12/15-LO抑制剂BA处理,能有效缓解小鼠EAE病情。两者对EAE的缓解作用均是通过诱导小胶质细胞PPARβ/δ表达实现的。BA处理的EAE小鼠CNS中炎症性细胞浸润及脱髓鞘情况明显降低。这种对EAE的缓解作用是通过诱导小胶质细胞PPARβ/δ的表达,从而调控小胶质细胞活性实现。通过脂代谢相关分子对CNS固有免疫细胞进行调控,从而有效缓解CNS炎症免疫的治疗思路为研制新的、有效的CNS炎症免疫调节及治疗途径提供了理论依据及实验基础。