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目的:观察补阳还五汤对缺氧损伤神经干细胞BDNF、GDNF表达的影响。 方法:⑴将原代培养的神经干细胞,随机分为4组:空白组、模型组、补阳还五汤血清组、正常血清对照组,于培养的第2天,取四组培养细胞各12孔,每孔加入4%多聚甲醛室温下固定30min,3%H2O2-0.1M PBS20min以去除内源性过氧化物酶,正常羊血清封闭,37℃孵育1h。将四组各12孔细胞进一步分成二个亚组,每个亚组六孔细胞,分别加入一抗(BDNF、GDNF),37℃孵育1h,经生物素化二抗和辣根酶标记链酶亲和素各1h(37℃) DAB显色,镜下控制反应时间,蒸馏水洗三次终止反应。以上操作除滴加封闭液后勿洗外,其它各步骤之间均须用0.1M PBS(含0.3%TritonX-100)洗5min×3次。在40倍物镜下观察缺氧损伤后神经干细胞的形态变化以及免疫反应阳性物的分布。对于阳性反应物的水平,则按每组6孔细胞,每孔细胞取5个互不重叠的视野,计算每个视野的阳性细胞数目。并用南京捷达DP801图像分析系统,分别统计BDNF和GDNF蛋白表达的阳性面积,取平均值。并进行统计学分析。 结果:补阳还五汤血清干预1 d后Nestin、NF-200、GFAP单标免疫细胞化学发现NF-200阳性细胞比例中实验组最高(66±7)%,与空白组和对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。补阳还五汤血清组BDNF、GDNF蛋白表达的阳性面积较正常血清对照组均有显著性升高(P<0.05) 结论:(1)补阳还五汤能够诱导神经干细胞分化。(2)补阳还五汤能够提高缺氧损伤神经干细胞BDNF、GDNF蛋白的表达。