高原红细胞增多症(High altitude polycythemia,HAPC)属于慢性高原病,以红细胞增多、血粘度增高为主要体征,缺氧是其形成的根本原因。在藏医理论中,HAPC属于藏医“多血症”范畴,是由于三因、血的紊乱及机能失调所致。多血康胶囊()是以藏医大师措如·才郎临床经验方为基础,主要功效为活血化瘀、清热解毒,临床以治疗多血症见长,疗效确切。课题组前期证明多血康胶囊的抗氧化活性较强,且能降低血瘀证家兔的全血粘度、缓解HAPC症状等,但其作用机制尚无研究。HAPC大鼠的脑组织蛋白表达与正常大鼠相较有何不同?多血康胶囊在干预HAPC的过程中,在分子水平上对机体有何影响?本课题拟采用蛋白质组学技术,找到不同组别大鼠的差异蛋白,分析多血康胶囊对HAPC的干预机制。目的:1.从耐缺氧、抗疲劳、营养健康效应评价及抗氧化四个方面对多血康胶囊进行药效学实验,明确多血康胶囊防治HAPC的相关药效;2.采用非标定量法的蛋白质组学技术对多血康干预的HAPC模型大鼠脑组织蛋白表达进行研究,分析不同组别大鼠的差异蛋白并选取个别蛋白进行验证,从分子层面探索多血康胶囊治疗HAPC的作用机制。方法:1.多血康胶囊药效学实验:(1)多血康胶囊耐缺氧实验,包括常压缺氧实验及亚硝酸钠中毒实验;(2)多血康胶囊抗疲劳实验,包括负重游泳实验及测定小鼠乳酸、肝糖原含量;(3)多血康胶囊的营养健康效应评价;(4)多血康胶囊干预HAPC模型大鼠的抗氧化实验,包括大鼠脑组织SOD、MDA及GSH-PX的检测。2.多血康胶囊对HAPC模型大鼠的脑组织差异蛋白研究:以大鼠脑组织为研究对象,基于LC-MS平台,采用非标记定量法,分别进行层次聚类分析、差异蛋白GO分类、通路分析及蛋白-蛋白相互作用网络构建,并采用Western Blot方法对相关差异蛋白进行验证。结果:1.多血康胶囊可以延长KM种小鼠常压缺氧实验、亚硝酸钠中毒实验、负重游泳实验的存活时间,能减少肝糖原的消耗及减少血清乳酸的生成,对小鼠的脾脏、肾脏、胰腺及性腺的补益BDI指数、健康效应BDI指数均大于1,对HAPC模型大鼠的SOD、MDA及GSH-PX指标均有一定的改善作用。2.采用Lable-free的蛋白质定量方法最终鉴定了19623肽段序列,匹配2914个Unique蛋白组。以P-value<0.05且fold change<0.40或fold change>1.60为条件,共找到组间差异蛋白224个,其中高原模型组改变表达的差异蛋白82个,多血康胶囊给药组与高原模型组对比改变表达的差异蛋白有155个。结论:1.多血康胶囊有耐缺氧、抗疲劳、抗氧化的药效作用,并有一定的补益及健康效应。2.采用Lable-free蛋白质定量技术,对藏药多血康治疗HAPC的差异蛋白研究是可行的,能够分析出不同组别的差异蛋白、蛋白的差异表达及蛋白-蛋白相互作用网络特点,揭示HAPC的发病机制及多血康胶囊对HAPC的分子作用机制与血液系统、能量代谢、神经系统及氧化应激有较明显的关系。