漆酶催化氧化17α-乙炔基雌二醇的实验研究

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环境激素是通过介入有机体内激素的合成、分泌、体内输送、结合、作用或分解而影响有机体的稳定性保持、生殖、发展或者行为的外来物质,又可以称为内分泌干扰物质或环境荷尔蒙。乙炔基雌二醇,简称EE2,是一种人工合成的环境激素,具有极强的内分泌干扰性,极其微量的EE2便会对生物体造成严重的影响,有可能导致动物的雌雄同体现象,以及生殖器官异常等。本文建立了漆酶催化氧化17α-乙炔基雌二醇的反应体系,首先选取真菌漆酶进行催化氧化反应,通过分光光度计和液相色谱仪进行分析,研究各实验条件对漆酶催化氧化17α-乙炔基雌二醇的影响。主要完成了(1)建立漆酶催化氧化EE2的反应体系;(2)以ABTS为底物测定漆酶的活性以及其最适温度和最适PH值。(3)研究各种反应条件,如PH值、温度、酶量、EE2浓度等对漆酶催化氧化17α-乙炔基雌二醇的影响;(4)研究添加助催化剂ABTS对漆酶催化氧化17α-乙炔基雌二醇的影响;(5)研究磁力震荡对漆酶催化氧化17α-乙炔基雌二醇的影响。本文还选取了不同种类的漆酶对EE2进行催化氧化反应,分析其去除效果。实验结果表明:以ABTS为底物测定真菌漆酶的最适温度为35℃,最适PH值为3.93。在选取真菌漆酶进行催化氧化17α-乙炔基雌二醇的反应时,漆酶的最适PH值为5.38,最适温度为35℃,酶量为0.75m1-2ml时,均有良好的EE2去除率,当EE2浓度为0.513mmol/L时,达到EE2最大去除量,反应体系在磁力振荡时,有更好的去除率,在添加助催化剂ABTS时,EE2去除率显著增加。实验还表明不同种类的漆酶,EE2去除效果不同。
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