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目的观察Piwi家族成员Piwil2重编程人包皮成纤维细胞获得的肿瘤干细胞(Piwil2-i CSC)体内成瘤组织的组织学特征。探究Piwil2/Piwil4蛋白与肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)预后的相关性。方法1挑选Piwil2-i CSC肿瘤球样克隆细胞进行裸鼠体内成瘤实验,组织学观察Piwil2-i CSC肿瘤组织病理特点,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化法检测Piwil2-i CSC肿瘤组织中干细胞标志物和常见三胚层肿瘤标志物,免疫组化法检测Piwil2-i CSC肿瘤组织中生殖细胞肿瘤标志物。2免疫荧光双标方法检测Piwil2及Piwil4蛋白在附有随访信息的肝细胞癌组织芯片中表达情况,探究单一标志物Piwil2、Piwil4及分子伴侣Piwil2/Piwil4在肿瘤细胞内表达定位差异对肝细胞癌远期生存率的影响。结果1接种2周时,裸鼠体内皮下100%形成肿瘤。Piwil2-i CSC肿瘤组织DAPI染色显示,Piwil2-GFP标记定位细胞核,且满视野高密度表达。HE染色显示,肿瘤细胞核分裂象高,每高倍镜下>10个核分裂象,核增大畸形。2RT-PCR检测显示,Piwil2-i CSC肿瘤组织仍高表达Piwil2、部分干细胞自我更新标志物和三胚层特征标志物。免疫组化染色显示,Piwil2-i CSC肿瘤组织表达相关干细胞标志物、三胚层多种肿瘤标志物和生殖细胞肿瘤标志物AFP、HCG。3肝细胞癌组织芯片免疫荧光双标检测显示:Piwil2以胞核表达为主,胞核表达强度高于胞浆;Piwil4胞核胞浆表达程度接近,胞浆表达强度高于胞核。4分子伴侣Piwil2/Piwil4在肝细胞癌共表达定位有四种规律,包括胞核共表达(Piwil2+/-Piwil4+/+、Piwil2+/-Piwil4+/-)、胞核胞浆共表达(Piwil2+/+Piwil4+/+)、胞浆共表达(Piwil2+/+Piwil4-/+)、无共表达部位(Piwil2+/-Piwil4-/-、Piwil2+/-Piwil4-/+、Piwil2+/+Piwil4-/-),患者生存率、总生存期依次递增。5生存期分析显示,Piwil2/Piwil4胞核共表达者预后表型明显差于无共表达部位者(P=0.034),单一标志物Piwil2、Piwil4细胞内表达定位差异均无统计学差异。结论1Piwil2-i CSC肿瘤可能为胚胎性未分化小细胞癌,以未成熟畸胎瘤混有卵黄囊瘤和绒癌成分可能性大,可为研究相关肿瘤的肿瘤干细胞起源或发生机制及诊疗方法提供研究模型。2Piwil2、Piwil4胞核部位表达提示更差的预后表型,分子伴侣Piwil2/Piwil4胞核共表达与HCC患者预后相关。3分子伴侣Piwil2/Piwil4有望作为HCC预后判断的重要分子标志物,单一标志物Piwil2、Piwil4不能作为HCC预后评估指标。